生物樣本百草枯檢測(cè)方法的建立及臨床應(yīng)用.pdf

1、第一部分高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)測(cè)定血液、尿液中百草枯濃度
　　目的:優(yōu)化一種利用電噴射接口串聯(lián)超高液相色譜儀及高分辨質(zhì)譜儀測(cè)定血漿、尿液中百草枯濃度的方法。進(jìn)而精確檢測(cè)百草枯中毒后在體內(nèi)的濃度，提供相應(yīng)臨床治療的指導(dǎo)依據(jù)。
　　方法:通過(guò)乙腈進(jìn)行一步蛋白沉淀處理，即可制備上機(jī)樣品，樣品通過(guò)親水性液相色譜柱（HICIL Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography）完成分離，借助

2、高效質(zhì)譜儀使用陰離子射線模式（Targeted-MS/MS scan mode）完成樣本測(cè)定。在此過(guò)程中優(yōu)化流動(dòng)相中甲酸銨及甲酸濃度，電噴霧電壓，毛細(xì)管加熱溫度，系統(tǒng)加熱溫度，質(zhì)譜儀碰撞能等檢測(cè)條件。
　　結(jié)果:在尿液測(cè)定中，本方法測(cè)定下限可達(dá)0.3 ng/ml，檢測(cè)上限為1000ng/ml。血漿測(cè)定中，測(cè)定下限為0.8 ng/ml，檢測(cè)上限為1000 ng/ml。該方法在可測(cè)定的上下限濃度之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，尿液測(cè)定方法日間

3、精密度和日內(nèi)精密度均小于4.78％，血漿測(cè)定方法的日間精密度和日內(nèi)精密度均小于7.97％。該測(cè)定方法的樣本回收率為93.51-100.90％。
　　結(jié)論:該研究利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，建立并優(yōu)化了一種操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性，敏感性，特異性高，用于測(cè)定人和豬血液、尿液百草枯濃度的方法。該檢測(cè)方法的建立可為臨床百草枯中毒劑量評(píng)估及患者相關(guān)治療提供參考，具有重要的臨床意義。
　　第二部分高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)評(píng)估百草枯中毒患者預(yù)

4、后
　　百草枯屬劇毒物，對(duì)人有很強(qiáng)的毒性，易導(dǎo)致多器官功能障礙。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，近年來(lái)百草枯中毒救治存活率有所上升，盡管如此，其病死率仍然居高不下，達(dá)50％。研究顯示，患者死亡率與體內(nèi)百草枯濃度呈正相關(guān)，因而及時(shí)、準(zhǔn)確建立百草枯體內(nèi)的測(cè)定方法顯得尤為重要。
　　目的:建立一種高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，測(cè)定患者血漿中百草枯含量，預(yù)測(cè)百草枯患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后，從而指導(dǎo)百草枯的臨床治療。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)選取了南京醫(yī)

5、科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2015年8月至2016年12月期間確診的35例百草枯中毒患者，患者入院后立即行血常規(guī)，肝腎功能，凝血，血?dú)夥治龅葯z查，洗胃、血液灌流、維持水電解質(zhì)平衡、補(bǔ)液等常規(guī)治療。利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)測(cè)定患者血漿中百草枯含量，以患者血液百草枯濃度將患者分為高、中、低3個(gè)劑量組，進(jìn)而評(píng)估患者百草枯中毒嚴(yán)重程度及預(yù)后。
　　結(jié)果:患者血液百草枯濃度預(yù)測(cè)死亡率的ROC曲線下面積為0.957(P＜0.0001)。百草枯中毒

6、嚴(yán)重指數(shù)(SIPP)預(yù)測(cè)死亡率ROC曲線下面積為0.928，(P＜0.0001)。高、中、低3個(gè)劑量組患者，白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清鉀、血清鈉、肌紅蛋白等指標(biāo)方面，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:血液中百草枯濃度及百草枯中毒嚴(yán)重指數(shù)可作為重要的評(píng)估指標(biāo)，在百草枯中毒患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的評(píng)估中發(fā)揮重要作用。
　　第三部分連二亞硫酸鈉在百草枯豬急性中毒模型胃液快速檢測(cè)中的應(yīng)用
　　目的:建立連二亞硫酸鈉紫外分光光度法檢測(cè)胃液中百

7、草枯濃度的檢測(cè)方法。
　　方法:將樣品解凍，充分渦旋后，以3000rpm轉(zhuǎn)速離心10min，微量移液器吸取上清液900ul至比色皿中進(jìn)行掃描，而后加入100ul檢測(cè)液，輕輕搖勻后，選擇最佳波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，每個(gè)樣品計(jì)算加入檢測(cè)液前后吸光度差值。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的9點(diǎn)校正曲線覆蓋線性范圍從1-500ug/ml(1，2，5，10，20，50，100，200，500ug/ml)中，體現(xiàn)了良好的線性，R＞0.99。日間精密度在4.7