川芎嗪對(duì)高糖或TNFα誘導(dǎo)后人腹膜間皮細(xì)胞IL6和IL8表達(dá)影響實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[背景]腹膜透析為終末期腎臟病患者替代治療的重要手段之一,其主要并發(fā)癥是腹膜纖維化。細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix,ECM)的過(guò)渡沉積為腹膜透析相關(guān)性腹膜纖維化主要特點(diǎn)。既往研究表明,常規(guī)高糖透析液可上調(diào)致纖維化細(xì)胞生長(zhǎng)因子如IL-6和IL-8的表達(dá),而后兩者是重要的細(xì)胞因子,可導(dǎo)致腹膜纖維化。
　　 [目的]本研究通過(guò)觀察川芎嗪對(duì)體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細(xì)胞(humanperitonealmesothelial

2、cells,HPMCs)在高糖及TNFα誘導(dǎo)后IL-6和IL-8分泌與表達(dá)的影響,進(jìn)一步研究和探討川芎嗪對(duì)HPMCs在高糖或TNFα誘導(dǎo)后致纖維化細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)的干預(yù)作用及其機(jī)制,為臨床上腹膜纖維化的防治提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 [方法]取自南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院普外科擇期腹部手術(shù)患者(排除尿毒癥和腹膜炎)捐獻(xiàn)的大網(wǎng)膜組織,采用胰蛋白酶法分離腹膜間皮細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)并傳代,第三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),每次實(shí)驗(yàn)均由來(lái)自3個(gè)患者的標(biāo)

3、本進(jìn)行3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。用含1％FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液同步24h后,試驗(yàn)分高糖環(huán)境和腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)的炎癥環(huán)境兩部分進(jìn)行,分組情況如下:
　　 ①高糖環(huán)境下:HPMCs分為五組(每組設(shè)3個(gè)樣本)觀察:空白對(duì)照組(完全培養(yǎng)液),高糖(2.5％葡萄糖)誘導(dǎo)組,高糖(2.5％葡萄糖)加低、中、高劑量川芎嗪(10mg/L、20mg/L和40mg/L)組。采用單四唑(monotetrazolium,MTT)法檢測(cè)各組間皮細(xì)胞的活性

4、;半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Semi-quantitativereversetranscriptive-polymerasechainreaction,RT-PCR)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)IL-6和IL-8mRNA表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)法檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-6和IL-8蛋白質(zhì)水平,細(xì)胞部分用二喹啉甲酸(bicinchoninicacid,BCA)蛋白檢測(cè)法測(cè)定細(xì)胞蛋白質(zhì)

5、含量,用以校正ELISA結(jié)果。
　　 ②TNFα誘導(dǎo)下:HPMCs分為五組(每組設(shè)3個(gè)樣本)觀察:空白對(duì)照組(完全培養(yǎng)液),TNFα誘導(dǎo)組,TNFα加低、中、高劑量川芎嗪(10mg/L、20mg/L和40mg/L)組。采用單四唑(monotetrazolium,MTT)法檢測(cè)各組間皮細(xì)胞的活性;半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Semi-quantitativereversetranscriptive-polymerasechainre

6、action,RT-PCR)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)IL-6和IL-8mRNA表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)法檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-6和IL-8蛋白質(zhì)水平,細(xì)胞部分用二喹啉甲酸(bicinchoninicacid,BCA)蛋白檢測(cè)法測(cè)定細(xì)胞蛋白質(zhì)含量,用以校正ELISA結(jié)果。
　　 [結(jié)果]①高糖環(huán)境下:與空白對(duì)照組比較,高糖能顯著降低HPMCs活性(P＜0.01),并顯著

7、上調(diào)HPMCsIL-6和IL-8的表達(dá)(P＜0.01);與高糖誘導(dǎo)組比較,川芎嗪干預(yù)組HPMCs活性顯著升高(P＜0.05),上清液中的IL-6和IL-8含量顯著降低(P＜0.05,P＜0.01),IL-6mRNA和IL-8mRNA表達(dá)水平均顯著下調(diào)(P＜0.05),且兩者在蛋白和基因水平與川芎嗪呈量效關(guān)系;
　　 ②炎癥狀態(tài)下:與空白對(duì)照組比較,TNFα能顯著降低HPMCs活性(P＜0.01),并顯著上調(diào)HPMCsIL-6和I

8、L-8的表達(dá)(P＜0.01);與TNFα誘導(dǎo)組比較,低劑量川芎嗪干預(yù)組HPMCs活性有所升高,但不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),中、高劑量川芎嗪干預(yù)組HPMCs活性顯著升高(P＜0.05),低、中、高劑量川芎嗪干預(yù)組上清液中的IL-6和IL-8含量顯著降低(P＜0.05,P＜0.01),IL-6mRNA和IL-8mRNA表達(dá)水平均顯著下調(diào)(P＜0.05),且兩者在蛋白和基因水平與川芎嗪呈量效關(guān)系;
　　 [結(jié)論]川芎嗪能下調(diào)高糖