辛伐他汀及川芎嗪對(duì)TNFα誘導(dǎo)后人腹膜間皮細(xì)胞t-PA和PAI-1表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：腹膜纖維化是腹膜透析的主要并發(fā)癥，是以細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的過(guò)渡沉積為特點(diǎn)。既往研究表明反復(fù)發(fā)作的腹膜炎可產(chǎn)生炎癥介質(zhì)，誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)積聚，最終導(dǎo)致腹膜纖維化，而組織型纖溶酶原激活物(t-PA)和纖溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)的表達(dá)在這一過(guò)程中起著重要作用。
　　 目的：本研究通過(guò)觀察辛伐他汀和川芎嗪對(duì)體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細(xì)胞(human peritoneal mesot

2、helial cells，HPMCs)在腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導(dǎo)后t-PA和PAI-1表達(dá)的影響，進(jìn)一步研究和探討辛伐他汀和川芎嗪對(duì)在炎癥狀態(tài)下HPMCs中t-PA和PAI-1表達(dá)的影響及其機(jī)制，為臨床上腹膜纖維化的防治提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：取自南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院普外科擇期腹部手術(shù)患者（排除尿毒癥和腹膜炎）捐獻(xiàn)的大網(wǎng)膜組織，采用胰蛋白酶法分離腹膜間皮細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)并傳代，第三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)

3、驗(yàn)均由來(lái)自3個(gè)患者的標(biāo)本進(jìn)行3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。用含1％FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液同步24h后，HPMCs分為八組（每組設(shè)3個(gè)樣本）觀察：空白對(duì)照組（完全培養(yǎng)液），單純TNF-α(1000ng/L)誘導(dǎo)組，TNF-α(1000ng/L)誘導(dǎo)加低、中、高劑量辛伐他汀(2.5、5和10μmol/L)組，和TNF-α(1000ng/L)誘導(dǎo)加低、中、高劑量川芎嗪(10、20和40mg/L)組，采用單四唑(monotetrazolium，MTT

4、)法檢測(cè)各組間皮細(xì)胞的活性；半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Semi-quantitative reverse transcriptlve-polymerase chain reaction，RT-PCR)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)t-PA和PAI-1的表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測(cè)細(xì)胞上清液中t-PA和PAI-1蛋白質(zhì)水平，細(xì)胞部分用二喹啉甲酸(bicinchoninicac

5、id，BCA)蛋白檢測(cè)法測(cè)定細(xì)胞蛋白質(zhì)含量，用以校正ELISA結(jié)果。
　　 結(jié)果：①與空白對(duì)照組比較，TNF-α能顯著降低HPMCs活性(P＜0.01)，同時(shí)HPMCst-PA生成減少和PAI-1的表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.01)；②與TNF-α誘導(dǎo)組比較，辛伐他汀干預(yù)組HPMCs活性顯著升高(P＜0.01)，上清液中的t-PA含量增加和PAI-1含量顯著下降(P＜0.01)，t-PAmRNA表達(dá)水平顯著上升和PAI-1mRNA表達(dá)水平

6、顯著下調(diào)(P＜0.01)，且兩者在蛋白和基因水平均與辛伐他汀呈量效關(guān)系；③與TNF-α誘導(dǎo)組比較，低劑量川芎嗪干預(yù)組HPMCs活性有所升高，但不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，中、高劑量川芎嗪干預(yù)組HPMCs活性顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)，上清液中的低、中、高劑量川芎嗪組上清液中t-PA的含量增加，PAI-1的含量顯著降低(P＜0.01)，t-PAmRNA表達(dá)水平顯著上升和PAI-1mRNA表達(dá)水平均顯著下調(diào)(P＜0.01)，