干擾素α-2b對丙肝患者鐵代謝的影響及其可能機制.pdf

1、研究背景：
　　丙型病毒性肝炎（viral hepatitis C）（下稱“丙肝”）容易轉(zhuǎn)慢性化，而且向肝硬化甚至肝癌的轉(zhuǎn)化率相當高[1]。近年研究顯示慢性丙型肝炎相對其他肝臟疾病更容易誘發(fā)肝組織病理惡變的其中一個主要原因可能由于丙型肝炎病毒
　?。╤epatitis C vires，HCV）感染誘發(fā)的肝內(nèi)鐵過載（Iron overload）較其他肝臟疾病更為嚴重，過量鐵介導的氧化損傷導致肝細胞受損更為劇烈，從而增加丙肝患者

2、肝臟向肝纖維化（hepatic fibrosis），甚至是肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）變遷的幾率[2,3]。
　　鐵是一把雙刃劍，它一方面是機體生命活動所需的必要元素，但過量的鐵則具有氧化毒性，能引起細胞和組織的劇烈損傷甚至誘發(fā)癌變[4]，因此機體內(nèi)的鐵水平受到嚴格的調(diào)節(jié)。鐵調(diào)素（Hepcidin）是一種主要由肝臟合成的關(guān)鍵的血清鐵負向調(diào)節(jié)激素，能與細胞膜上唯一的鐵離子運送通路蛋白——弗林

3、轉(zhuǎn)運蛋白（ferroportin，F(xiàn)PN）結(jié)合使其內(nèi)化及降解加速，調(diào)節(jié)鐵離子在細胞內(nèi)外的分布而決定循環(huán)鐵水平，進而影響小腸對鐵的吸收[5]。由于鐵特殊的生理作用，因此Hepcidin也必須受控于一定范圍之內(nèi)以確保機體鐵平衡。目前學界發(fā)現(xiàn)HCV感染能誘發(fā)明顯鐵過載的原因與機體Hepcidin水平的顯著下降有關(guān)[2]。
　　干擾素α（Interferonα，IFNα）是現(xiàn)階段丙肝患者抗病毒治療的一個主流藥物，而高鐵負荷則是丙肝患者對I

4、FNα抗病毒治療不應(yīng)答的其中一個主要因素[6]。有報道[7]稱丙肝患者在經(jīng)過IFNα治療后體內(nèi)含鐵量會出現(xiàn)不同程度的增高，作為目前應(yīng)用最為普及的IFNα亞型之一，干擾素α-2b（Interferonα-2b，IFNα-2b）本身對機體鐵代謝的影響，尤其是對肝細胞合成Hepcidin的干擾作用還沒清晰。轉(zhuǎn)錄激活子3（signal transduction and transcription activator3, STAT3）通路是一條經(jīng)

5、典的細胞抗凋亡通路，眾多實驗顯STAT3信號通路是細胞因子對Hepcidin表達產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用的主要信號通路[8]，同時有文獻稱STAT3通路與IFNα對丙肝患者的抗病毒療效密切有關(guān)[9]，但IFNα-2b是否同樣通過STAT3通路對肝細胞合成Hepcidin產(chǎn)生影響，迄今鮮見報道。
　　研究目的：
　　鑒于丙型肝炎的病情進展與鐵代謝之間的重要聯(lián)系以及IFNα-2b治療對丙肝患者鐵代謝影響作用的未知領(lǐng)域，本研究擬：
　　

6、1、分析丙肝患者血漿HCV病毒載量與血清鐵指標之間的相關(guān)性，進一步研究HCV感染與機體鐵紊亂之間的關(guān)系；同時觀察干擾素α-2b（IFNα-2b）治療對丙肝患者血清鐵代謝指標的影響。
　　2、分析IFNα-2b對肝源性 HepG2細胞 Hepcidin表達水平的影響，初步探討IFNα-2b影響丙肝患者血清鐵代謝指標的原因，為更好的監(jiān)測丙肝患者的病程提供新的思路。
　　3、STAT3通路在IFNα-2b對HepG2細胞Hepci

7、din表達水平調(diào)節(jié)過程中的意義；為改善IFNα-2b使用后可能引起的鐵紊亂狀態(tài)提供潛在治療靶點。
　　研究方法
　　1、對28例近3個月內(nèi)未經(jīng)抗病毒治療丙肝患者，按外周血病毒載量分為高復(fù)制組、低復(fù)制組；并隨機抽選20例健康體檢者為對照組，分析3組患者血清鐵蛋白（SF）和血清游離鐵（SI）的差異。
　　2、按外周血ALT是否高于40U/L將39例丙肝患者血清分為異常組及正常組，比較2組間SF和SI的不同。
　　3、

8、按3個月內(nèi)是否曾受IFNα-2b治療把丙肝患者歸為治療組及未治療組，以20例健康體檢者為對照組，分別檢測3組SF、SI以及血清Hepcidin水平，并分析組間差異。
　　4、用逐漸增量的IFNα-2b誘導肝源性HepG2細胞，real-time PCR檢測Hepcidin、白細胞介素6（IL-6）、STAT3分子的mRNA表達量，分析隨著IFNα-2b濃度的遞增，HepG2細胞3種分子mRNA表達水平的變化。
　　5、Wes

9、tern blotting檢測經(jīng)IFNα-2b處理后的HepG2細胞的STAT3及磷酸化STAT3（phosphorylated STAT3，pSTAT3）蛋白表達水平，并分析其隨IFNα-2b加入量不同的變化。
　　結(jié)果
　　1、丙肝患者SF和SI均高于健康組(P<0.05)，高、低復(fù)制組之間SF、SI差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2、ALT異常組SI、SF均明顯高于正常組（P<0.05）。
　　3、

10、治療組及未治療組血清Hepcidin均低于對照組（P<0.05），SF及SI均高于對照組。未治療組血清Hepcidin高于治療組（P<0.05），SF低于治療組（P<0.05）。
　　4、隨IFNα-2b濃度的增加，HepG2細胞Hepcidin mRNA表達逐漸下降（P<0.05）， IL-6和STAT3的mRNA表達無明顯變化（P>0.05）。
　　5、HepG2細胞pSTAT3蛋白水平隨IFNα-2b加入量的增加而顯著

11、下調(diào)（P<0.05），與Hepcidin mRNA下降趨勢一致；各組STAT3蛋白水平無明顯改變（P>0.05）。
　　結(jié)論
　　1、丙肝患者血清鐵指標明顯高于健康人，且可能與肝損傷有關(guān)；但與血漿HCV病毒載量不明顯相關(guān)。
　　2、曾接受IFNα-2b治療的丙肝患者血清鐵指標高于健康人及未經(jīng)抗病毒治療的丙肝患者，血清 Hepcidin水平則低于健康人及未治療者?？赡苁怯捎诒位颊吒渭毎鸋epcidin基因表達受IFNα