黑根霉胞外多糖對MNNG致小鼠慢性萎縮性胃炎的抑制作用.pdf

1、慢性萎縮性胃炎(Chronic atrophic gastritis，CAG)是一種常見的消化系統(tǒng)疾病，該病癥嚴(yán)重影響患者的消化功能。CAG的發(fā)生伴隨腸上皮化生和異型性增生，此二者在臨床上是胃癌癌前病變的重要指標(biāo)。目前臨床上治療CAG的藥物只能消除胃黏膜病變部位的炎癥和緩解疼痛，多數(shù)治療藥物存在藥物依賴和損傷其它器官等不良反應(yīng)。因此，尋找治療效果顯著、毒副作用小且能提高機(jī)體免疫能力的藥物具有重要意義。
　　真菌多糖具有抗氧化、抗炎

2、癥、提高機(jī)體免疫能力等活性。黑根霉（Rhizopusnigricans）是一種接合菌類絲狀真菌，在液體發(fā)酵過程中可產(chǎn)生大量胞外多糖。在前期研究中，本課題組從黑根霉發(fā)酵液中分離出粗多糖EPS，在體外可抑制人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞及人白血病K562細(xì)胞的增殖。EPS可以通過線粒體途徑誘導(dǎo)結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞凋亡。EPS也能夠抑制S180荷瘤小鼠的腫瘤生長，提高小鼠免疫能力，延長S180荷瘤小鼠的存活時間。
　　本研究通過建立CA

3、G小鼠模型，研究EPS對由1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(MNNG)誘導(dǎo)小鼠CAG的作用。
　　1.EPS治療給藥對MNNG誘導(dǎo)小鼠的作用，實(shí)驗(yàn)選取5周齡雄性BALB/c小鼠并隨機(jī)分為對照組、MNNG組（MNNG66.7 mg/kg/d）和MNNG+EPS組(MNNG66.7 mg/kg/d、EPS75 mg/kg/d)，每組5只，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行20周后測定相關(guān)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，第20周，MNNG組小鼠平均體重（28.3+0.9 g

4、）及進(jìn)食量(168.5 g)小于對照組小鼠平均體重（34.4±1.1 g）及進(jìn)食量(189 g); MNNG+EPS組小鼠平均體重（30.0±0.8 g）及進(jìn)食量(174 g)大于MNNG組。小鼠胃組織和肝組織病理學(xué)檢查結(jié)果表明，對照組小鼠胃黏膜腺體完整，肝組織細(xì)胞完整、形態(tài)規(guī)則無細(xì)胞間隙;MNNG組小鼠胃腺體萎縮并伴有胃黏膜肌層增生現(xiàn)象，胃內(nèi)出現(xiàn)多處出血點(diǎn)，肝組織細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞間隙較大;MNNG+EPS組小鼠胃黏膜僅出現(xiàn)黏膜充血

5、未出現(xiàn)明顯肌層增生現(xiàn)象，多數(shù)肝細(xì)胞形態(tài)完整，細(xì)胞間隙較小。小鼠免疫器官指數(shù)測定結(jié)果表明，MNNG組胸腺指數(shù)（0.59+0.002 mg/g）和脾臟指數(shù)（3.49+0.02 mg/g）小于對照組，該組小鼠免疫能力降低;MNNG+EPS組胸腺指數(shù)（0.68±0.002 mg/g）(P＜0.05)和脾臟指數(shù)（3.55±0.02 mg/g）均高于MNNG組。各組小鼠肝腎功能檢測結(jié)果表明，MNNG組天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate amin

6、otransferase，AST)含量（163.0+13.5 U/l）低于對照組，MNNG+EPS組AST含量（183.0±40.0 U/l）高于MNNG組;血清肌酐(Serumcreatinine，Cr)含量（31.4+4.67 mg/dl）和血尿素氮(Blood urea nitrogen，BUN)含量（11.0+0.99 mg/dl）高于對照組;MNNG+EPS組MNNG組Cr(28.8+8.41 mg/dl)和BUN（9.5+1

7、.17 mg/dl）含量低于MNNG組。上述結(jié)果說明，EPS多糖治療給藥方式可有效抑制小鼠CAG的發(fā)生和病癥的發(fā)展。
　　2.EPS預(yù)防給藥對MNNG誘導(dǎo)小鼠CAG的作用，實(shí)驗(yàn)選取5周齡雄性BALB/c小鼠并隨機(jī)分為對照組、MNNG組(MNNG133 mg/kg/d)和MNNG+EPS組（MNNG133 mg/kg/d、EPS200 mg/kg/d），每組8只，實(shí)驗(yàn)前2周MNNG+EPS組小鼠僅飲用EPS水溶液，其他組別自由飲水，

8、2周之后再按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并持續(xù)到第20周，之后測定相關(guān)指標(biāo)。小鼠體征及外觀形態(tài)觀察結(jié)果表明，對照組小鼠體型肥碩，背毛濃密有光澤，無豎毛現(xiàn)象，四肢抓握力量大;MNNG組小鼠體型瘦小，背毛稀疏存在豎毛現(xiàn)象，四肢幾乎無抓握能力;MNNG+EPS組小鼠體型適中，背毛濃密無光澤無豎毛現(xiàn)象，四肢抓握力量小。各組小鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)評定分級結(jié)果表明，對照組患中、重度CAG的小鼠比例為0/8，MNNG組患中、重度CAG的小鼠比例為5/8，MNNG

9、+EPS組患中、重度CAG的小鼠比例為2/8。各組小鼠胃組織細(xì)胞中與CAG形成相關(guān)基因COX-2和EGF mRNA表達(dá)量差異結(jié)果表明，對照組COX-2和EGF表達(dá)量較低，MNNG組COX-2和EGF的表達(dá)量要高于對照組，MNNG+EPS組COX-2和EGF表達(dá)量低于MNNG組但高于對照組。上述結(jié)果說明，EPS多糖預(yù)防給藥方式可有效抑制小鼠CAG的發(fā)生和病癥的發(fā)展，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與治療給藥方式結(jié)果大致相同。
　　3.磺酰羅丹明B（SRB）