黃芩苷對(duì)腦出血大鼠腦損傷保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、腦出血（intracerebrAlhemomhage ICH）是指腦實(shí)質(zhì)內(nèi)血管破裂性出血，是臨床常見的急癥，發(fā)病率高，死亡率高，尤其是重癥病人，30d內(nèi)死亡率高達(dá)30％～50％，預(yù)后極差[1]。中醫(yī)藥治療腦出血的臨床療效肯定，但缺乏科學(xué)性論證，且對(duì)其作用機(jī)理的研究甚少，使得中醫(yī)藥的研究與應(yīng)用很難與世界接軌，因此對(duì)其進(jìn)行深入研究具有十分重要的意義。
　　 我室的前期實(shí)驗(yàn)研究表明，黃芩苷能夠提高SOD活性,抵抗自由基的損害,降低MD

2、A含量，同時(shí)會(huì)抑制NOS活性，降低NO含量，抑制其產(chǎn)生的神經(jīng)毒性，并能提高腦內(nèi)抑制性氨基酸含量，降低興奮性氨基酸含量，進(jìn)而達(dá)到保護(hù)腦組織的作用[2-3]。
　　 抑制性氨基酸GABA主要通過與三種特異性受體相互作用發(fā)揮其生理活性：GABAAR、GABABR和GABAcR[4]。其中GABAAR是哺乳類動(dòng)物大腦中含量最多也是最重要的GABA受體[5]。GABA轉(zhuǎn)運(yùn)體(GABA transporter，GAT)能夠快速攝取細(xì)胞外液和

3、突觸間隙的GABA，終止GABA對(duì)突觸后膜受體的作用，從而結(jié)束GABA的突觸傳遞過程[6]。研究發(fā)現(xiàn)，一些神經(jīng)退行性疾病，如帕金森氏癥，脊髓側(cè)索硬化癥，阿爾茨海默病等，以及一些神經(jīng)系統(tǒng)損傷，如外傷，缺血，出血等均存在Caspase-3參與的細(xì)胞凋亡過程，抑凋亡蛋白Bcl-2在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病過程中也具有重要作用[7-8]。
　　 研究方法和目的：
　　 本研究通過采用膠原酶+肝素鈉法誘導(dǎo)腦出血模型，按200m

4、g/kg劑量進(jìn)行黃芩苷灌胃，于不同時(shí)間點(diǎn)，采用HE染色觀察大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；采用免疫組化染色的方法觀察腦出血后腦內(nèi)的γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GAT-1，γ-氨基丁酸受體GABAAR，促凋亡因子Caspase-3，抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)變化；利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)了腦出血后腦內(nèi)神經(jīng)元的凋亡率，以及黃芩苷的作用。進(jìn)一步探討了黃芩苷對(duì)大鼠腦出血后腦損傷的保護(hù)機(jī)制，為進(jìn)一步了解腦出血疾病的發(fā)病機(jī)制及研制出血性腦損傷保護(hù)劑提供新的理論依據(jù)。

5、
　　 研究結(jié)果：
　　 1.大鼠腦出血模型的復(fù)制與其行為學(xué)及神經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察：結(jié)果表明，腦出血后大鼠的行為以及腦組織神經(jīng)元有明顯的變化；黃芩苷給藥后，大鼠的行為明顯改善，在第三天基本恢復(fù)正常，腦出血狀況得到緩解，神經(jīng)元損傷也有明顯改善。
　　 2.腦組織內(nèi)的GAT-1和GABAAR表達(dá)的變化：免疫組化方法結(jié)果顯示，腦出血后12 h 腦內(nèi)GAT-1表達(dá)開始上調(diào)，24 h表達(dá)最高，72 h仍有一定強(qiáng)度表達(dá)，7 d后恢

6、復(fù)到正常水平；GABAAR的表達(dá)在12 h有所上調(diào)，24 h開始下降，72 h降到最低，7 d時(shí)恢復(fù)到正常水平。黃芩苷給藥后，各時(shí)間點(diǎn)的GAT-1陽性神經(jīng)元數(shù)目都有明顯下降；GABAAR陽性神經(jīng)元數(shù)目增多。
　　 3.腦出血后腦內(nèi)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)：采用免疫組化方法檢測(cè)了腦組織內(nèi)的Caspase-3和Bcl-2表達(dá)變化。結(jié)果顯示，腦出血后1d大腦皮質(zhì)內(nèi)Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)目明顯增多，3 d呈現(xiàn)較強(qiáng)陽性表達(dá)，7 d開始下降；B

7、cl-2的表達(dá)在腦出血后1d沒有明顯變化，3 d達(dá)到開始增多，7 d達(dá)到高峰。黃芩苷給藥后Caspase-3陽性神經(jīng)元明顯減少；Bcl-2陽性細(xì)胞數(shù)量增加，反應(yīng)增強(qiáng)。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。結(jié)果顯示，模型組大鼠腦組織細(xì)胞凋亡率水平上升；黃芩苷給藥后，腦組織細(xì)胞凋亡率水平明顯降低。
　　 結(jié)論：
　　 研究結(jié)果表明，腦內(nèi)的GAT-1和GABAAR可能參與大鼠腦出血后神經(jīng)元損傷的病理生理過程，腦出血后神經(jīng)元的凋亡也