HO-1對(duì)大鼠腦出血后腦損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:血紅素氧合酶(heme oxygenase,HO)是紅細(xì)胞分解的限速酶，其活性會(huì)因機(jī)體的應(yīng)激狀態(tài)而發(fā)生變化，HO-1是目前發(fā)現(xiàn)的受最多因素誘導(dǎo)的應(yīng)激蛋白。通過(guò)觀察腦出血后血腫周圍腦組織含水量、HO-1活性、非血紅素鐵含量、自由基和炎性因子的變化以及HO-1抑制劑-錫原卟啉(tin-protoporphyrin，SnPP)對(duì)上述表達(dá)的影響，探討實(shí)驗(yàn)性腦出血后紅細(xì)胞降解產(chǎn)物及HO-1的損傷作用及其機(jī)制，以及SnPP對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血后腦損

2、傷的保護(hù)作用，為臨床治療腦出血提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。方法:將雄性SD大鼠(n=104)隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(n=8)、PRBCs組(n=48)、SnPP組(n=48)，后兩組按術(shù)后處死時(shí)間各分為1d、2d、3d、7d、14d、21d六個(gè)亞組，每個(gè)亞組8只大鼠。用大鼠自體紅細(xì)胞注入尾狀核制作腦出血模型，SnPP組動(dòng)物模型注入自體紅細(xì)胞與SnPP混合溶液，假手術(shù)組進(jìn)行手術(shù)過(guò)程但不給予注血。在術(shù)后2 h進(jìn)行模型成功評(píng)價(jià)。在術(shù)后各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取4只

3、大鼠，采用干濕法測(cè)定血腫周圍腦組織含水量，放射免疫法測(cè)定血腫周圍腦組織炎性因子(TNF-α)水平，比色法測(cè)定血腫周圍腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量；另取4只大鼠在術(shù)后各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)用生理鹽水心臟灌注，采用比色法測(cè)定血腫周圍腦組織非血紅素鐵含量和HO-1活性。結(jié)果:與假手術(shù)組相比較，PRBCs組在術(shù)后1d血腫周圍腦組織含水量開始增加(P<0.05)，2d～7d腦組織含水量明顯增高(P<0.05)，在3d達(dá)高峰；PR

4、BCs組在術(shù)后2d～14d各時(shí)點(diǎn)血腫周圍腦組織HO-1活性、非血紅素鐵含量顯著高于假手術(shù)組(P<0.05)，HO-1活性在3d達(dá)到最高，非血紅素鐵含量在14d達(dá)到最高；PRBCs組在術(shù)后2d～7d各時(shí)點(diǎn)血腫周圍腦組織TNF-α水平、MDA含量顯著高于假手術(shù)組(P＜0.05)，在3d達(dá)到最高；PRBCs組在術(shù)后ld～14d各時(shí)點(diǎn)血腫周圍腦組織SOD活力顯著低于假手術(shù)組(P＜0.05)，在3d SOD活力降低最明顯；PRBCs組在術(shù)后各時(shí)點(diǎn)

5、血腫周圍腦組織含水量與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)HO-1活性、TNF-α水平、MDA含量呈明顯正相關(guān)(r=0.894，P<0.001；r=0.464，P=0.023；r=0.923，P<0.001)，與SOD活力呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.867，P<0.001);PRBCs組在術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周圍HO-1活性與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)SOD活力呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.882，P<0.001)，與MDA含量呈明顯正相關(guān)(r=0.877，P<0.001)。與PRBCs組相比較，

6、SnPP組在術(shù)后2d～7d各時(shí)點(diǎn)血腫周圍腦組織含水量、MDA含量顯著低于PRBCs組(P<0.05)，在2d～14d HO-1活性顯著低于PRBCs組(P<0.05)，在3d～21d非血紅素鐵含量顯著低于PRBCs組(P<0.05)，在ld～7d SOD活力顯著高于PRBCs組(P<0.05)，TNE-α平與PRBCs組比較未見明顯差異(P>0.05)；SnPP組在術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周圍腦組織含水量與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)HO-1活性、TNF-α水平、M

7、DA含量呈明顯正相關(guān)(r=0.923，P<0.001；r=0.473，P=0.020；r=0.799，P<0.001)，與SOD活力呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.827，P<0.001)；SnPP組在術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周圍HO-1活性與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)SOD活力呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.832，P<0.001)，與MDA含量呈明顯正相關(guān)(r=0.833，P<0.001)。結(jié)論:(1)自體分離紅細(xì)胞注入法制作腦出血模型，能排除血漿成分、白細(xì)胞和血小板的干擾，

8、有利于突出研究紅細(xì)胞及其降解產(chǎn)物在腦出血后腦水腫及腦損傷中的作用； (2)腦出血后3天血腫周圍腦組織含水量、H0-1活性、非血紅素鐵含量、TNF-α水平、MDA含量明顯升高，SOD活力明顯下降，提示紅細(xì)胞大量溶解后其降解產(chǎn)物可能參與了出血性腦水腫的發(fā)展過(guò)程，在遲發(fā)性腦水腫的形成過(guò)程中起重要作用； (3)腦出血后血腫周圍非血紅素鐵含量顯著增加并且持續(xù)升高，腦水腫消退后仍有鐵離子蓄積；(4)腦出血后紅細(xì)胞降解，HO-1活性表達(dá)增強(qiáng)，可導(dǎo)致S