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1、目的:血紅素氧合酶(heme oxygenase,HO)是紅細(xì)胞分解的限速酶,其活性會(huì)因機(jī)體的應(yīng)激狀態(tài)而發(fā)生變化,HO-1是目前發(fā)現(xiàn)的受最多因素誘導(dǎo)的應(yīng)激蛋白。通過(guò)觀察腦出血后血腫周圍腦組織含水量、HO-1活性、非血紅素鐵含量、自由基和炎性因子的變化以及HO-1抑制劑-錫原卟啉(tin-protoporphyrin,SnPP)對(duì)上述表達(dá)的影響,探討實(shí)驗(yàn)性腦出血后紅細(xì)胞降解產(chǎn)物及HO-1的損傷作用及其機(jī)制,以及SnPP對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血后腦損
2、傷的保護(hù)作用,為臨床治療腦出血提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。方法:將雄性SD大鼠(n=104)隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(n=8)、PRBCs組(n=48)、SnPP組(n=48),后兩組按術(shù)后處死時(shí)間各分為1d、2d、3d、7d、14d、21d六個(gè)亞組,每個(gè)亞組8只大鼠。用大鼠自體紅細(xì)胞注入尾狀核制作腦出血模型,SnPP組動(dòng)物模型注入自體紅細(xì)胞與SnPP混合溶液,假手術(shù)組進(jìn)行手術(shù)過(guò)程但不給予注血。在術(shù)后2 h進(jìn)行模型成功評(píng)價(jià)。在術(shù)后各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取4只
3、大鼠,采用干濕法測(cè)定血腫周圍腦組織含水量,放射免疫法測(cè)定血腫周圍腦組織炎性因子(TNF-α)水平,比色法測(cè)定血腫周圍腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;另取4只大鼠在術(shù)后各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)用生理鹽水心臟灌注,采用比色法測(cè)定血腫周圍腦組織非血紅素鐵含量和HO-1活性。結(jié)果:與假手術(shù)組相比較,PRBCs組在術(shù)后1d血腫周圍腦組織含水量開始增加(P<0.05),2d~7d腦組織含水量明顯增高(P<0.05),在3d達(dá)高峰;PR
4、BCs組在術(shù)后2d~14d各時(shí)點(diǎn)血腫周圍腦組織HO-1活性、非血紅素鐵含量顯著高于假手術(shù)組(P<0.05),HO-1活性在3d達(dá)到最高,非血紅素鐵含量在14d達(dá)到最高;PRBCs組在術(shù)后2d~7d各時(shí)點(diǎn)血腫周圍腦組織TNF-α水平、MDA含量顯著高于假手術(shù)組(P<0.05),在3d達(dá)到最高;PRBCs組在術(shù)后ld~14d各時(shí)點(diǎn)血腫周圍腦組織SOD活力顯著低于假手術(shù)組(P<0.05),在3d SOD活力降低最明顯;PRBCs組在術(shù)后各時(shí)點(diǎn)
5、血腫周圍腦組織含水量與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)HO-1活性、TNF-α水平、MDA含量呈明顯正相關(guān)(r=0.894,P<0.001;r=0.464,P=0.023;r=0.923,P<0.001),與SOD活力呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.867,P<0.001);PRBCs組在術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周圍HO-1活性與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)SOD活力呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.882,P<0.001),與MDA含量呈明顯正相關(guān)(r=0.877,P<0.001)。與PRBCs組相比較,
6、SnPP組在術(shù)后2d~7d各時(shí)點(diǎn)血腫周圍腦組織含水量、MDA含量顯著低于PRBCs組(P<0.05),在2d~14d HO-1活性顯著低于PRBCs組(P<0.05),在3d~21d非血紅素鐵含量顯著低于PRBCs組(P<0.05),在ld~7d SOD活力顯著高于PRBCs組(P<0.05),TNE-α平與PRBCs組比較未見明顯差異(P>0.05);SnPP組在術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周圍腦組織含水量與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)HO-1活性、TNF-α水平、M
7、DA含量呈明顯正相關(guān)(r=0.923,P<0.001;r=0.473,P=0.020;r=0.799,P<0.001),與SOD活力呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.827,P<0.001);SnPP組在術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周圍HO-1活性與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)SOD活力呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.832,P<0.001),與MDA含量呈明顯正相關(guān)(r=0.833,P<0.001)。結(jié)論:(1)自體分離紅細(xì)胞注入法制作腦出血模型,能排除血漿成分、白細(xì)胞和血小板的干擾,
8、有利于突出研究紅細(xì)胞及其降解產(chǎn)物在腦出血后腦水腫及腦損傷中的作用; (2)腦出血后3天血腫周圍腦組織含水量、H0-1活性、非血紅素鐵含量、TNF-α水平、MDA含量明顯升高,SOD活力明顯下降,提示紅細(xì)胞大量溶解后其降解產(chǎn)物可能參與了出血性腦水腫的發(fā)展過(guò)程,在遲發(fā)性腦水腫的形成過(guò)程中起重要作用; (3)腦出血后血腫周圍非血紅素鐵含量顯著增加并且持續(xù)升高,腦水腫消退后仍有鐵離子蓄積;(4)腦出血后紅細(xì)胞降解,HO-1活性表達(dá)增強(qiáng),可導(dǎo)致S
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