ESR1經(jīng)SDF-1-CXCR4介導的BMSCs修復子宮內(nèi)膜與內(nèi)膜纖維化在宮腔粘連發(fā)病及治療中的研究.pdf

1、第一章：SDF-1/CXCR4介導BMSCs修復子宮內(nèi)膜與內(nèi)膜纖維化失衡在宮腔粘連發(fā)病機制中的研究
　　目的：
　　通過檢測宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜ESR1、干細胞、纖維化和內(nèi)膜容受性指標，探討宮腔粘連（IUA）形成過程中骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）修復子宮內(nèi)膜與內(nèi)膜纖維化之間的關(guān)系；探尋BMSCs在內(nèi)膜修復中的作用。
　　方法：
　　1.2015.9-2016.2，我院宮腔鏡診治中心接受宮腔粘連手術(shù)患者56人（粘

2、連評分≥9分），其中輕中度粘連40人（9-18分），重度粘連16人（≥19分）；同期行子宮縱隔手術(shù)20人作為對照。在黃體期行激素檢測以P＞5ng/ml做為納入指標，年齡18-42歲。收集患者一般資料，B超測量內(nèi)膜厚度。
　　2.于手術(shù)電切前取子宮內(nèi)膜組織，分別行qRT-PCR、Western Blot（WB）、免疫組化（IHC）檢測ESR1，干細胞相關(guān)指標SDF-1、CXCR4，纖維化相關(guān)指標TGF-β1、MMP-9及子宮內(nèi)膜容受

3、性指標VEGF、αvβ3 mRNA和蛋白表達情況。
　　結(jié)果：
　　1.子宮內(nèi)膜厚度
　　黃體期檢測患者子宮內(nèi)膜厚度，結(jié)果顯示各組內(nèi)膜厚度不同，宮腔粘連患者內(nèi)膜厚度明顯低于對照組，且隨粘連程度加重而變薄。
　　2. ESR1
　　各組ESR1表達不同。宮腔粘連患者ESR1表達明顯高于對照組，且隨粘連程度加重而升高。
　　3.干細胞相關(guān)指標SDF-1、CXCR4
　　3.1.SDF-1
　　

4、各組SDF-1 mRNA和蛋白表達無明顯差異。
　　3.2.CXCR4
　　僅IHC檢測重度IUA-對照組中CXCR4蛋白表達不同，重度IUA組CXCR4蛋白表達低于對照組；余各組CXCR4表達無明顯差異。
　　4.纖維化相關(guān)指標TGF-β1、MMP-9
　　4.1.TGF-β1
　　各組TGF-β1表達不同。IUA患者TGF-β1表達明顯高于對照組，且隨粘連程度加重而升高。
　　4.2.MMP-9<

5、br>　　各組MMP-9表達不同。IUA患者MMP-9表達明顯高于對照組，且隨粘連程度加重而升高。
　　5.內(nèi)膜容受性相關(guān)指標VEGF、整合素β3（αvβ3）
　　5.1.VEGF
　　各組VEGF表達無明顯差異。
　　5.2.αvβ3
　　僅IHC檢測重度IUA-對照組中αvβ3蛋白表達不同，重度IUA組αvβ3蛋白表達低于對照組；余各組αvβ3表達無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　內(nèi)膜損傷后，宮

6、腔粘連形成過程中內(nèi)膜修復與纖維化失衡，導致細胞外基質(zhì)沉積、內(nèi)膜纖維化；此過程中ESR1升高，內(nèi)膜纖維化反應激增，而BMSCs對內(nèi)膜修復機制受抑制，內(nèi)膜容受性似有下降。
　　第二章：雌激素對SDF-1/CXCR4介導的BMSCs子宮內(nèi)膜修復及內(nèi)膜纖維化在宮腔粘連治療中的影響
　　目的：
　　用不同劑量的雌激素（戊酸雌二醇）治療TCRA術(shù)后的宮腔粘連患者，了解不同劑量雌激素對患者下丘腦-垂體-卵巢軸的影響；檢測子宮內(nèi)膜ES

7、R1、干細胞、纖維化和內(nèi)膜容受性指標，探討不同劑量雌激素對宮腔粘連患者術(shù)后恢復的影響。
　　方法：
　　1.2015.9-2016.2，我院宮腔鏡診治中心宮腔粘連手術(shù)患者56人（粘連評分≥9分），其中輕中度粘連40人（9-18分），重度粘連16人（≥19分）；年齡18-42歲。
　　2.所有患者均由一人常規(guī)行宮腔鏡粘連電切術(shù)（TCRA），術(shù)后宮內(nèi)置入防粘連膜包裹的圓形金屬節(jié)育環(huán)一枚。術(shù)后3月取環(huán)。
　　3.分別用

8、戊酸雌二醇4mg（23人）、6mg（17人）和9mg（16人）對TCRA術(shù)后患者進行治療。其中輕中度粘連患者術(shù)后接受雌激素治療，EV4mg組19例，EV9mg組9例；重度粘連患者術(shù)后接受雌激素治療，EV4mg組4例，EV9mg組7例。于手術(shù)后1月、3月行宮腔鏡檢查評估手術(shù)效果。
　　4.術(shù)前、術(shù)后1月、術(shù)后3月黃體期采集患者外周血檢測FSH、E2、P，評估患者卵巢功能及排卵情況。
　　5.于手術(shù)電切前、術(shù)后1月、術(shù)后3月取子

9、宮內(nèi)膜組織，分別行qPCR、Western Blot檢測ESR1，干細胞相關(guān)指標SDF-1、CXCR4，纖維化相關(guān)指標TGF-β1、MMP-9及子宮內(nèi)膜容受性指標VEGF、αvβ3 mRNA和蛋白的表達情況。
　　6.取環(huán)后隨訪3月，了解患者月經(jīng)及受孕情況。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況
　　1.1.宮腔鏡檢查情況
　　術(shù)后1月復查宮腔再次發(fā)生粘連2例，均為重度粘連患者，其中1例即刻行TCRA手術(shù)恢復宮腔形

10、態(tài)；另1例左宮角粘連封閉，左側(cè)環(huán)臂局部嵌頓，鏡鞘鈍性分離之。術(shù)后3月復查除前例左宮角粘連例外無新發(fā)宮腔粘連。余宮腔形態(tài)恢復正常，環(huán)各臂無嵌頓，內(nèi)膜近覆蓋整個創(chuàng)面。
　　1.2.激素治療對卵巢功能的影響
　　EV4mg組，排卵抑制率為8.69%（2/23）；EV6mg組，排卵抑制率為58.82%（10/17）；EV9mg組，排卵抑制率為93.75%（15/16）。
　　停藥后1月內(nèi)未排卵率：雌激素EV4mg組為4.34%

11、（1/23）；EV6mg組為17.64%（3/17）；EV9mg組為56.25%（9/16）。
　　1.3.月經(jīng)及妊娠情況
　　取環(huán)后3個月，除3例月經(jīng)量無明顯改善外，其余53例月經(jīng)量接近或恢復正常，治療有效率達94.6%（53/56）。13例取環(huán)后3月內(nèi)妊娠，妊娠率達23.21%（13/56）；其中9例為取環(huán)術(shù)后次月妊娠，4例為取環(huán)術(shù)后2-3月內(nèi)妊娠；1例為稽留流產(chǎn)，余均妊娠8周以上，1例正常分娩，無并發(fā)癥。近期治愈率達2

12、3.21%（13/56）（取環(huán)后3個月內(nèi)妊娠）。
　　2.治療前后ESR1變化
　　治療后ESR1表達明顯下降。重度IUA組、輕中度IUA組、EV4mg組和EV9mg組前后對照差異均有統(tǒng)計學意義。
　　3.治療前后干細胞相關(guān)指標SDF-1、CXCR4變化。
　　術(shù)后SDF-1表達經(jīng)歷先升高后下降的過程，至術(shù)后3月已降至術(shù)前水平。
　　治療前后CXCR4表達無明顯變化。
　　4.治療前后纖維化相關(guān)指標T

13、GF-β1、MMP-9變化
　　治療后TGF-β1表達明顯下降。重度IUA組、輕中度IUA組、EV4mg組治療后明顯下降。EV9mg組治療前后無顯著性差異。
　　治療后MMP-9表達明顯下降。輕中度IUA組、EV4mg組治療后明顯下降。重度IUA組、EV9 mg組治療前后無顯著性差異。
　　5.治療前后子宮內(nèi)膜容受性指標VEGF、αvβ3變化
　　治療前后VEGF表達無明顯變化。
　　治療后αvβ3表達明顯

14、升高；輕中度IUA組和EV4mg組治療后明顯升高；但重度IUA組和EV9mg組治療前后無顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　宮腔粘連患者經(jīng)TCRA+術(shù)后應用防粘連材料+術(shù)后激素治療綜合治療后，能糾正宮腔形態(tài)，抑制內(nèi)膜纖維化，促進內(nèi)膜修復創(chuàng)面，顯著改善月經(jīng)狀況，并在短期內(nèi)達到治愈。BMSCs在近期內(nèi)膜修復過程中起效甚微。不同劑量雌激素對患者卵巢功能影響不同，大劑量雌激素對卵巢功能抑制作用更明顯而持久。中等劑量雌激素與大劑量雌激素相比

15、對抑制內(nèi)膜纖維化、促進內(nèi)膜修復似乎更具優(yōu)勢。
　　第三章：SD大鼠宮腔粘連子宮內(nèi)膜模型的建立和鑒定
　　目的：
　　建立并鑒定大鼠宮腔粘連子宮內(nèi)膜模型，與臨床標本進行一致性驗證，為課題組開展IUA的干細胞移植治療提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.200-250g未交配雌性SD大鼠10只。造模組左側(cè)子宮用無水乙醇宮腔內(nèi)注射造模，對照組右側(cè)子宮給予生理鹽水做對照。
　　2.于術(shù)后三個動情周期處死實驗鼠，

16、行HE染色觀察子宮內(nèi)膜組織形態(tài)變化；Masson染色了解內(nèi)膜纖維化程度；WB、qPCR檢測ESR1，纖維化相關(guān)指標TGF-β1表達情況。
　　結(jié)果：
　　1.造模組大鼠左側(cè)子宮內(nèi)膜腺體稀疏，基質(zhì)水腫，部分區(qū)域肉芽組織樣增生，厚度明顯薄于對照組。
　　2.造模組Masson染色纖維化面積明顯高于對照組。
　　3.造模組ESR1的表達明顯高于對照組。
　　4.造模組纖維化相關(guān)指標TGF-β1的表達明顯高于對照組