全反式維甲酸在宮腔粘連模型中抗子宮內(nèi)膜纖維化作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　子宮作為女性的內(nèi)生殖器，是孕育胎兒的重要器官。女性進(jìn)入育齡期后，子宮內(nèi)膜的功能層在雌孕激素作用下發(fā)生增生、剝脫出血及再生修復(fù)，這種生理性的周期性修復(fù)過程不會出現(xiàn)宮腔粘連，有學(xué)者將這種修復(fù)過程稱為無瘢痕修復(fù)。當(dāng)基底層子宮內(nèi)膜受到創(chuàng)傷、感染，出現(xiàn)纖維化改變時(shí)即可發(fā)生宮腔粘連(IUA)。IUA的治療難點(diǎn)是預(yù)防分離術(shù)后再粘連的形成。轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)是最強(qiáng)烈的致纖維化因子。在IUA患者的子宮內(nèi)膜中檢測到TGF-β

2、1的高表達(dá)。此外，基質(zhì)金屬蛋白酶9、胰島素樣生長因子-Ⅰ等細(xì)胞因子均可能參與了宮腔粘連的形成。全反式維甲酸(ATRA)是維生素A的衍生物，具有廣泛的生物學(xué)活性，近年許多學(xué)者還報(bào)導(dǎo)發(fā)現(xiàn)具有抗纖維化作用。目前有關(guān)ATRA在宮腔粘連領(lǐng)域中的研究未見報(bào)道。
　　目的：
　　本課題基于ATRA抗纖維化作用，通過體外實(shí)驗(yàn)探討其對人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞的影響，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察ATRA在IUA動物模型上的預(yù)防和治療作用，初步揭

3、示ATRA在IUA領(lǐng)域的抗纖維化價(jià)值，為臨床應(yīng)用ATRA提高IUA治療效果、改善其預(yù)后提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　第一章:ATRA作用于ESCs纖維化模型;RT-PCR檢測COL1A1、α-SMAmRNA的水平;WB檢測COL1A1、α-SMA蛋白表達(dá)情況。
　　第二章:建立宮腔粘連模型，腹腔注射低、中、高濃度ATRA;HE染色進(jìn)行子宮內(nèi)膜腺體的計(jì)數(shù);Masson染色觀察子宮內(nèi)膜間質(zhì)膠原的沉積;IHC檢測子宮內(nèi)膜T

4、GF-β1的表達(dá);HE染色光鏡下觀察心、肝、腎組織結(jié)構(gòu);RT-PCR檢測TGF-β1、smad4、COL1A1及COL1A2mRNA的表達(dá);WB檢測TGF-β1、smad4、COLⅠ蛋白的表達(dá)。
　　第三章:于建模后7d、14d開始腹腔注射ATRA;HE染色、Masson染色、IHC檢測、RT-PCR檢測、WB檢測內(nèi)容及方法均同第二章。
　　結(jié)果：
　　第一章:在TGF-β1的持續(xù)刺激下，原代人ESCs呈現(xiàn)出肌成纖維細(xì)

5、胞的改變。ATRA能顯著下調(diào)COL1A1、α-SMAmRNA的表達(dá)，下調(diào)COL1A1、α-SMA蛋白的表達(dá)。
　　第二章:ATRA預(yù)防性實(shí)驗(yàn)?zāi)茱@著增加子宮內(nèi)膜腺體的數(shù)量，減少膠原的沉積，下調(diào)TGF-β1蛋白的表達(dá)。各組心、肝、腎組織結(jié)構(gòu)正常。ATRA能顯著下調(diào)TGF-β1、smad4、COL1A1及COL1A2mRNA的表達(dá)，下調(diào)TGF-β1、smad4、COLⅠ蛋白的表達(dá)。
　　第三章:ATRA早期治療能增加腺體計(jì)數(shù)，降低

6、膠原沉積，顯著降低TGF-β1、smad4、COL1A1及COL1A2mRNA的表達(dá);下調(diào)TGF-β1、smad4、COLⅠ蛋白的表達(dá)。ATRA晚期治療未能改善子宮內(nèi)膜纖維化。
　　結(jié)論：
　　ATRA在體外能抑制子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，降低細(xì)胞膠原COL1A1的生成，從而發(fā)揮其抗子宮內(nèi)膜纖維化的作用。ATRA通過下調(diào)TGF-β1/smad信號通路，可預(yù)防宮腔粘連形成。如在早期應(yīng)用有治療IUA作用，晚期應(yīng)用治療I