2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景和目的:
  活化的肝臟星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells HSC)是肝纖維化進(jìn)程中的核心細(xì)胞,肝臟自然殺傷細(xì)胞(natrual kill cell NK)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)是調(diào)控纖維化進(jìn)程的重要因素之一,干擾素-α(interferon-αIFN-α)可免疫調(diào)控NK細(xì)胞功能。
  1.本實驗通過建立不同階段纖維化小鼠肝臟 NK/HSC體外共培養(yǎng)體系,研究肝臟NK細(xì)胞和HSC細(xì)胞之間的相互作用機(jī)制

2、,進(jìn)一步闡明NK細(xì)胞抗纖維化的作用機(jī)制。
  2.通過IFN-α直接干預(yù)NK/HSC共培養(yǎng)體系,檢測NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性及分泌干擾素-γ(interferon-γIFN-γ)功能,闡明IFN-α抗纖維化的免疫學(xué)機(jī)制,為臨床應(yīng)用IFN-α提供實驗室證據(jù)。
  研究方法:
  1.取8周齡雄性C57BL/6J小鼠,腹腔注射四氯化碳(carbon tetrachloride CCL4)建立早期階段(2周組)和晚期階段(8周組)

3、肝纖維化小鼠模型。不同密度梯度法提取不同纖維化階段小鼠 HSC,磁珠分選法提取不同纖維化階段小鼠肝臟NK細(xì)胞,建立各組NK/HSC共培養(yǎng)體系。
  2.在各組共培養(yǎng)體系中加入抗小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand TRAIL)抗體、以抗小鼠NK細(xì)胞組2成員D(natural killer group2 member D NK

4、G2D)抗體、抗小鼠 IFN-γ抗體和抗小鼠轉(zhuǎn)化因子β1(transforming growth factorβ1 TGF-β1)抗體,共培養(yǎng)24小時,LDH檢測法檢測不同纖維化階段小鼠NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性。ELISA檢測不同階段纖維化小鼠肝臟NK細(xì)胞的細(xì)胞分泌IFN-γ功能。
  3.IFN-α干預(yù)各組纖維化小鼠NK/HSC共培養(yǎng)體系及HSC獨(dú)立培養(yǎng)組。LDH檢測法檢測不同纖維化階段小鼠NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性。ELISA法檢測不同階段

5、纖維化小鼠肝臟NK細(xì)胞的細(xì)胞分泌功能。流式細(xì)胞術(shù)檢測HSC凋亡率。
  結(jié)果:
  1.成功建立2周組(早期)、8周組(晚期)肝纖維化模型小鼠,并分離、培養(yǎng)各組小鼠肝臟HSC和NK細(xì)胞,建立2周組、8周組NK/HSC共培養(yǎng)體系,加入相應(yīng)抗體干預(yù)后,共培養(yǎng)24小時取得上清液。
  2.檢測各組共培養(yǎng)體系的NK細(xì)胞毒性及分泌IFN-γ水平,得到以下結(jié)果:
  1)2周組小鼠肝臟NK/HSC共培養(yǎng)體系 NK細(xì)胞毒性及分

6、泌 IFN-γ水平高于8周組(29.72%±0.49%VS17.52%±0.60 p<0.01;24.27±0.68pg/ml VS13.48±0.37pg/ml p<0.01);
  2)以抗小鼠 TRAIL抗體、以抗小鼠NKG2D抗體、抗小鼠IFN-γ抗體干預(yù)2周組、8周組小鼠肝臟NK/HSC共培養(yǎng)體系,其NK細(xì)胞毒性分泌IFN-γ水平均低于無抗體干預(yù)組(p<0.01);
  3)以抗小鼠 TGF-β1抗體干預(yù)2周組、8

7、周組NK/HSC共培養(yǎng)體系,NK細(xì)胞毒性及分泌IFN-γ水平均高于無抗體干預(yù)組(54.08%±2.76%VS29.72%±1.49% p<0.01;29.41±0.21pg/mlVS24.3±0.81pg/ml p<0.01),(49.81%±2.93% VS17.52%±1.61% p<0.01;19.87±0.23pg/mlVS13.38±0.38pg/ml p<0.01)。且TGF-β1抗體對8周組小鼠肝臟NK細(xì)胞毒性及分泌IFN

8、-γ增加程度大于2組周(p<0.01)。
  3.以IFN-α干預(yù)2周組、8周組小鼠肝臟NK/HSC共培養(yǎng)體系 NK細(xì)胞毒性高于無 IFN-α干預(yù)組(45.71%±0.87% VS29.66%±0.38%p<0.01;20.97%±0.70%VS16.39%±0.40%; p<0.01)且2周組NK細(xì)胞毒性增加程度大于8周組(P<0.01);但是IFN-α對NK細(xì)胞分泌IFN-γ的促進(jìn)作用僅見于2周組(27.57±0.19pg/m

9、lVS24.27±0.68pg/ml p<0.01),8周組干預(yù)前后無統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.176>0.05)。IFN-α干預(yù)可通過增強(qiáng) NK細(xì)胞功能提高2周組、8周組 NK/HSC共培養(yǎng)體系 HSC凋亡率(27.37%±0.03% VS22.72%±0.16%t=-188.237,22.26%±0.03%VS20.39%±0.27%t=11.893,p<0.01),而對HSC無直接誘導(dǎo)凋亡作用(P>0.05)。
  結(jié)論:

10、  NK細(xì)胞可通過NKG2D、TRAIL表面受體途徑及分泌大量的IFN-γ抑制殺傷活化的HSC,發(fā)揮其抗抑制纖維化作用。在晚期纖維化階段 NK細(xì)胞功能被HSC分泌的TGF-β1抑制,使其對HSC的殺傷能力下降,肝纖維化持續(xù)發(fā)展。在肝纖維化早期,IFN-α通過增強(qiáng)NK細(xì)胞毒性及分泌IFN-γ能力,增強(qiáng)NK細(xì)胞的抗纖維化作用,而這種作用在纖維化晚期因TGF-β1的強(qiáng)抑制作用效果不顯著。
  總結(jié):
  IFN-α可能過增強(qiáng)NK細(xì)

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