銀杏葉提取物EGb761改善脂多糖誘導(dǎo)的小鼠抑郁樣行為及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過(guò)單次和重復(fù)間歇腹腔注射LPS的方法，制備急、慢性抑郁樣行為小鼠模型，通過(guò)EGb761預(yù)處理和治療，觀察小鼠行為學(xué)改變，對(duì)比炎性因子、BDNF、氧化應(yīng)激及皮質(zhì)酮表達(dá)水平干預(yù)前后的變化，初步明確EGb761抗抑郁作用，進(jìn)一步探討該藥的抗抑郁機(jī)理，為EGb761應(yīng)用于抑郁癥的治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.動(dòng)物模型的建立與評(píng)估
　　(1)急性抑郁樣行為小鼠模型
　　選用C57BL/6

2、J雄性小鼠，腹腔內(nèi)單次注射LPS，劑量為830μg/kg，應(yīng)用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)、蔗糖偏好實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)評(píng)估小鼠抑郁樣行為的形成。
　　(2)慢性抑郁樣行為小鼠模型
　　選用C57BL/6J雌性小鼠，每月相同5天連續(xù)腹腔注射LPS，劑量依次是:750μg/kg、1000μg/kg、1250μg/kg、1000μg/kg、750μg/kg，連續(xù)注射4個(gè)月，應(yīng)用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)、蔗糖偏好實(shí)驗(yàn)評(píng)估小鼠抑郁樣行為的形成。<

3、br>　　2.實(shí)驗(yàn)分組與實(shí)驗(yàn)過(guò)程
　　(1) EGb761預(yù)處理對(duì)急性抑郁樣行為小鼠行為學(xué)的影響與機(jī)制
　　40只C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、EGb761低劑量組、EGb761中劑量組和EGb761高劑量組，每組8只。從實(shí)驗(yàn)第1天至12天，EGb761低、中、高劑量組小鼠分別給予EGb76150 mg/kg/day、100 mg/kg/day和150mg/kg/day（生理鹽水溶解）灌胃，對(duì)照組和模型組小

4、鼠給予等量生理鹽水;經(jīng)過(guò)10天預(yù)處理，模型組、EGb761低、中、高劑量組小鼠均腹膜內(nèi)注射LPS，劑量為830μg/kg，小鼠腹腔注射LPS24h后，采用曠場(chǎng)試驗(yàn)評(píng)估EGb761對(duì)小鼠的自發(fā)活動(dòng)的影響，采用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)和蔗糖偏好實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)EGb761對(duì)小鼠抑郁樣行為的影響。
　　行為學(xué)評(píng)價(jià)完成后，小鼠麻醉處死，取大腦組織，在冰上剝離出海馬，用勻漿器制成勻漿，4℃、5000 rpm離心15 min，上清液分裝后，-20℃保存

5、。ELISA測(cè)定小鼠海馬組織炎性細(xì)胞因子和BDNF水平。
　　(2) EGb761治療對(duì)慢性抑郁樣行為小鼠行為學(xué)的影響與機(jī)制
　　40只C57BL/6J雌性小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、EGb761低劑量組、EGb761中劑量組和EGb761高劑量組，每組8只;模型組、EGb761低、中、高劑量組小鼠每月相同5天連續(xù)腹腔注射LPS，劑量依次是:750μg/kg、1000μg/kg、1250μg/kg、1000μg/kg、750

6、μg/kg，對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水，連續(xù)注射4個(gè)月;造模完成后，EGb761低、中、高劑量組分別給予EGb76150 mg/kg/day、100 mg/kg/day和150 mg/kg/day（生理鹽水溶解）灌胃1個(gè)月，對(duì)照組和模型組小鼠給予等量生理鹽水。采用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)和蔗糖偏好實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)EGb761對(duì)小鼠慢性抑郁樣行為的影響。
　　行為學(xué)評(píng)價(jià)完成后，小鼠麻醉處死，取血靜置后，4℃、3000 rpm離心5min，取上

7、清，-20℃保存。取大腦組織，在冰上剝離出海馬，用勻漿器制成勻漿，4℃、5000 rpm離心15 min，上清液分裝后，-20℃保存。
　　結(jié)果：
　　1.LPS誘導(dǎo)急性和慢性炎癥致小鼠抑郁樣行為
　　與對(duì)照組相比，腹腔注射LPS可使小鼠FST和TST表現(xiàn)出明顯延長(zhǎng)的不動(dòng)時(shí)間(P＜0.05)，而且小鼠蔗糖水偏嗜度顯著降低(P＜0.05)，這說(shuō)明單次和重復(fù)間歇腹腔注射LPS皆可誘導(dǎo)小鼠顯著的抑郁樣行為;在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，急性

8、抑郁模型組小鼠的水平得分和垂直得分均較對(duì)照組減少(P＜0.05)，這表明腹腔注射LPS可減少小鼠的自發(fā)活動(dòng)。
　　2.EGb761預(yù)處理對(duì)急性抑郁樣行為小鼠的影響
　　(1)改善急性抑郁樣行為
　　與模型組相比，EGb761中劑量組和高劑量組小鼠FST和TST的不動(dòng)時(shí)間明顯縮短(P＜0.05)，而且，EGb761高劑量組小鼠的不動(dòng)時(shí)間短于EGb761低劑量組和中劑量組(P＜0.05)。
　　蔗糖偏嗜實(shí)驗(yàn)中，EGb

9、761中劑量組和高劑量組小鼠的蔗糖水偏嗜度要高于的模型組(P＜0.05)，EGb761高劑量組小鼠的蔗糖水偏嗜度要高于EGb761低劑量組（P＜0.05）;以上結(jié)果表明，EGb761預(yù)處理對(duì)單次腹腔注射LPS誘導(dǎo)的抑郁樣行為小鼠有抗抑郁作用，并且其作用呈劑量相關(guān)性。
　　在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，模型組、EGb761高劑量組、中劑量組和低劑量組之間小鼠的水平得分和垂直得分無(wú)顯著差別(P＞0.05)，這提示EGb761預(yù)處理對(duì)小鼠的自發(fā)活動(dòng)沒(méi)有

10、顯著影響。
　　(2)調(diào)節(jié)海馬炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生
　　與對(duì)照組相比，模型組小鼠海馬促炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17A的濃度更高(P＜0.05)，而海馬抗炎性細(xì)胞因子IL-10的濃度低于對(duì)照組（P＜0.05），這表明腹腔注射LPS可誘導(dǎo)小鼠海馬的炎癥。然而，與模型組相比，預(yù)先給予中劑量和高劑量EGb761均顯著抑制海馬TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17A水平的升高，同時(shí)升高IL-10的水平（

11、P＜0.05）;此外，高劑量EGb761的抗炎作用要強(qiáng)于EGb761低劑量和中劑量（P＜0.05）。
　　(3)增加海馬BDNF的水平
　　與對(duì)照組相比，模型組小鼠海馬BDNF的濃度低于對(duì)照組(P＜0.05)，然而，與模型組相比，預(yù)先給予中劑量和高劑量EGb761均顯著升高海馬BDNF的水平（P＜0.05）;此外，高劑量EGb761的作用要強(qiáng)于EGb761低劑量和中劑量(P＜0.05)。
　　3.EGb761治療對(duì)慢性

12、抑郁樣行為小鼠的影響
　　(1)改善慢性抑郁樣行為
　　與模型組相比，EGb761中劑量組和高劑量組小鼠FST和TST的不動(dòng)時(shí)間明顯縮短(P＜0.05)，而且，EGb761高劑量組小鼠的不動(dòng)時(shí)間短于EGb761低劑量組和中劑量組(P＜0.05)。
　　蔗糖偏嗜實(shí)驗(yàn)中，EGb761中劑量組和高劑量組小鼠的蔗糖水偏嗜度要高于的模型組（P＜0.05），EGb761高劑量組小鼠的蔗糖水偏嗜度要高于EGb761低劑量組(P＜0.

13、05);以上結(jié)果表明，EGb761治療對(duì)重復(fù)間歇腹腔注射LPS誘導(dǎo)的慢性抑郁樣小鼠有抗抑郁作用，并且其作用呈劑量相關(guān)性。
　　(2)調(diào)節(jié)海馬和血清炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生
　　在小鼠海馬，與對(duì)照組相比，模型組小鼠促炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的濃度更高（P＜0.05），而海馬抗炎性細(xì)胞因子IL-10的濃度低于對(duì)照組(P＜0.05)，這表明連續(xù)4個(gè)月重復(fù)、間歇LPS腹腔注射也可誘導(dǎo)小鼠海馬的炎癥。EGb761給藥1個(gè)月后，與模型

14、組相比，EGb761中劑量和高劑量組均顯著抑制海馬TNF-α和IL-6水平的升高以及IL-10水平的降低(P＜0.05)。此外，高劑量EGb761的抗炎作用要強(qiáng)于EGb761低劑量和中劑量（P＜0.05）。
　　(3)降低海馬和血清氧化應(yīng)激水平
　　與對(duì)照組相比，連續(xù)4個(gè)月重復(fù)、間歇LPS腹腔注射可顯著升高模型組小鼠海馬和血清的MDA含量（P＜0.05），同時(shí)，海馬和血清SOD、CAT和GSH-Px的活性下降（P＜0.05）

15、。EGb761給藥1個(gè)月后，低劑量組、中劑量組和高劑量組小鼠海馬和血清的MDA含量均降低，與模型組相比差異顯著(P＜0.05)。此外，給予EGb761高劑量和中劑量治療，可恢復(fù)小鼠海馬和血清SOD、CAT和GSH-Px的活性，與模型組相比差異顯著(P＜0.05)，并且EGb761高劑量的作用更強(qiáng)（P＜0.05）。
　　(4)降低血清CORT的濃度
　　與對(duì)照組相比，連續(xù)4個(gè)月重復(fù)、間歇LPS腹腔注射可顯著升高模型組小鼠血清C

16、ORT的濃度（P＜0.05）。EGb761給藥1個(gè)月后，中劑量組和高劑量組小鼠血清CORT的濃度均降低，與模型組相比差異顯著(P＜0.05)，此外，EGb761高劑量抑制小鼠血清CORT的作用更強(qiáng)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.單次和重復(fù)間歇腹腔注射LPS均可誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠顯著的抑郁樣行為，重復(fù)間隔LPS給藥誘導(dǎo)的抑郁樣行為持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。
　　2.EGb761預(yù)處理可顯著減輕單次腹腔注射LPS小鼠的急

17、性抑郁樣行為，并且其作用呈劑量相關(guān)性;同時(shí)，EGb761預(yù)處理可抑制小鼠海馬促炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17A的產(chǎn)生，并能恢復(fù)小鼠海馬BDNF和抗炎性細(xì)胞因子IL-10的水平;EGb761抗抑郁作用與其抑制海馬的炎癥相關(guān)。
　　3.EGb761治療可減輕重復(fù)間歇腹腔注射LPS小鼠的慢性抑郁樣行為，并且其作用呈劑量相關(guān)性;同時(shí)，EGb761治療可抑制小鼠海馬TNF-α，IL-6以及海馬和血清MDA的產(chǎn)生，恢