內(nèi)源性硫化氫在血吸蟲(chóng)病性門(mén)靜脈高壓癥中的作用及機(jī)制.pdf

1、由于門(mén)靜脈系統(tǒng)血流動(dòng)力學(xué)異常變化而產(chǎn)生的綜合征稱為門(mén)靜脈高壓癥，目前其發(fā)病機(jī)制尚不非常明確，主要病理生理特點(diǎn)是門(mén)靜脈壓力增高、門(mén)靜脈系統(tǒng)高動(dòng)力循環(huán)及門(mén)靜脈系統(tǒng)的高血流量。血管活性物質(zhì)在門(mén)靜脈高壓癥發(fā)病中的重要作用已經(jīng)被認(rèn)識(shí)，血管收縮劑或舒張劑通過(guò)調(diào)節(jié)全身或內(nèi)臟血管的舒縮，影響門(mén)體側(cè)支循環(huán)血流和肝內(nèi)或門(mén)體側(cè)支循環(huán)的阻力。
　　 內(nèi)源性硫化氫參與了多種生理與病理過(guò)程，目前內(nèi)源性硫化氫這種第三種氣體信號(hào)分子已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。根據(jù)內(nèi)源性

2、硫化氫在心血管系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用研究，我們推測(cè)其在門(mén)靜脈高壓癥的發(fā)生、發(fā)展、惡化及預(yù)后中可能也起著一定的作用。內(nèi)源性硫化氫在門(mén)靜脈高壓癥發(fā)病機(jī)制中的作用尚屬起步階段，因此本課題將以血吸蟲(chóng)病性門(mén)靜脈高壓癥為研究模型，分析H2S在門(mén)靜脈高壓發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中所起的作用，以探討H2S在門(mén)靜脈高壓癥中變化及作用，進(jìn)一步研究門(mén)靜脈高壓癥的發(fā)病機(jī)制，為門(mén)靜脈高壓癥的臨床治療探索新思路或新方法。
　　 一、目的
　　 1.探究人

3、門(mén)靜脈高壓癥患者是否存在內(nèi)源性硫化氫的改變。以測(cè)定門(mén)靜脈高壓癥患者不同Child分級(jí)之間的H2S水平差異，發(fā)現(xiàn)H2S在是否在門(mén)靜脈高壓癥患者血漿中發(fā)生變化，并探討其在門(mén)靜脈高壓癥時(shí)的作用機(jī)制。
　　 2．建立血吸蟲(chóng)病性門(mén)靜脈高壓癥兔疾病模型，觀察不同時(shí)期其肝臟形態(tài)改變、肝纖維化情況、肝功能、門(mén)靜脈直徑，為課題的順利實(shí)施提供穩(wěn)定、可靠的動(dòng)物模型。
　　 3．在建立血吸蟲(chóng)病性門(mén)靜脈高壓癥兔疾病模型的基礎(chǔ)上，觀察門(mén)靜脈高壓癥兔

4、血漿中H2S含量的變化，以及與肝功能、肝纖維化指標(biāo)之間的關(guān)系，以探討H2S在門(mén)靜脈高壓癥兔發(fā)病過(guò)程中的變化及意義。
　　 4．觀察兔肝組織中H2S含量、硫化氫合酶CSE的活性及CSE Mrna表達(dá)情況的變化及其與肝纖維化組織學(xué)病變的關(guān)系，從而進(jìn)一步探討H2S在血吸蟲(chóng)病性門(mén)靜脈高壓癥的發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 5．明確血吸蟲(chóng)病性門(mén)靜脈高壓癥兔內(nèi)源性H2S對(duì)HO-1/CO通路的調(diào)節(jié)作用，闡明內(nèi)源性硫化氫與一氧化碳的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，

5、以及內(nèi)源性硫化氫在門(mén)靜脈高壓癥發(fā)病、維持高動(dòng)力循環(huán)、血管構(gòu)型改建等的作用機(jī)制。
　　 二、方法
　　 1.收集2007年9月～2007年12月在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院綜合醫(yī)療科病房及器官移植病房住院治療的肝硬化門(mén)靜脈高壓癥患者臨床資料及血樣標(biāo)本。對(duì)照組為同期于同濟(jì)醫(yī)院體檢健康人群。多普勒超聲檢查門(mén)靜脈管徑(PVC)，確定門(mén)靜脈高壓癥的Child分級(jí)，去蛋白法測(cè)定血漿H2S含量。
　　 2．采用腹部敷貼

6、法感染血吸蟲(chóng)尾蚴制作血吸蟲(chóng)病性門(mén)靜脈高壓癥兔模型，感染后8W、12W、16W行肝臟MRI檢查，留取血標(biāo)本， HE染色、透射電鏡觀察肝組織形態(tài)學(xué)變化。 3．采用去蛋白的方法測(cè)定血漿H2S含量，采用放射免疫法檢測(cè)血清HA、C-IV、LN及PCⅢ，并分析血漿H2S含量與肝纖維化指標(biāo)之間的相關(guān)關(guān)系。
　　 4．檢測(cè)肝組織中H2S含量、肝組織中硫化氫合酶活性，以RT-PCR檢測(cè)肝組織CSE Mrna的表達(dá)選取第12W動(dòng)物模型行肝臟HE染色

7、進(jìn)行肝組織形態(tài)學(xué)觀察。
　　 5．將采用分子生物學(xué)技術(shù)、免疫組化染色技術(shù)和生物化學(xué)檢測(cè)方法來(lái)觀察內(nèi)源性硫化氫體系對(duì)血吸蟲(chóng)病性門(mén)靜脈高壓癥兔HO-1/CO通路的影響。
　　 三、結(jié)果
　　 1.門(mén)靜脈高壓癥患者不同Child分級(jí)的肘靜脈血漿內(nèi)源性H2S含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且與對(duì)照組均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。門(mén)靜脈高壓癥患者血漿H2S含量與其PVC具有負(fù)線性相關(guān)關(guān)系。
　　 2．兔血吸蟲(chóng)尾蚴急性感染成功率100％

8、，模型組大體及MRI可見(jiàn)肝體積縮小，組織變硬，肝表面凹凸不平，中量腹水，脾臟腫大。HE及透射電鏡證實(shí)肝纖維化存在。
　　 3．外周血、門(mén)靜脈血血漿H2S濃度與門(mén)靜脈高壓癥的嚴(yán)重程度、肝臟標(biāo)本大體、肝纖維化指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)，且隨著門(mén)靜脈高壓癥的情加重呈逐漸降低的趨勢(shì)，給予硫化氫外源性供體NaHS后，各項(xiàng)指標(biāo)較模型組好轉(zhuǎn)；給予了CSE酶抑制劑PPG后，各項(xiàng)指標(biāo)較模型組加重。
　　 4.PHT組兔肝組織中H2S含量、肝組織中硫化氫

9、合酶活性均較對(duì)照組降低，RT-PCR檢測(cè)肝組織CSE Mrna的表達(dá)亦減少。NaHS可引起門(mén)靜脈高壓癥兔肝組織中H2S合酶活性及H2S含量升高，肝臟病理學(xué)檢查提示匯管區(qū)肝纖維化較同期模型組減輕；通過(guò)腹腔注射H2S合成酶CSE的抑制劑PPG顯示門(mén)靜脈高壓癥兔肝組織中H2S合酶活性及H2S含量下降，肝臟病理學(xué)檢查提示肝匯管區(qū)纖維化加重。
　　 5． PHT組與對(duì)照組相比，兔血漿中CO含量、肝組織HO-1活性、肝組織HO-1蛋白的表達(dá)

10、、肝組織HO-1Mrna表達(dá)的增加。NaHS+PHT組以上各指標(biāo)均較PHT下降，而PHT+PPG組與PHT組相比，均無(wú)明顯改變。
　　 四、結(jié)論
　　 1.門(mén)靜脈高壓癥患者內(nèi)源性硫化氫含量低于正常人群，并且隨病情的分級(jí)加重而逐漸降低，血漿H2S含量與門(mén)靜脈管徑、Child分級(jí)呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明門(mén)靜脈高壓癥時(shí)H2S含量降低，為課題的進(jìn)一步開(kāi)展提供了理論基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)技術(shù)的可靠性。
　　 2．本模型屬自然演變形成，符合人體感

11、染血吸蟲(chóng)病所致的門(mén)靜脈高壓癥的病程規(guī)律，且造模成功率較高、死亡率較低，是研究血吸蟲(chóng)病及門(mén)脈高壓癥的理想動(dòng)物模型。
　　 3．在門(mén)靜脈高壓癥的發(fā)病過(guò)程中血漿內(nèi)源性H2S可能起保護(hù)作用，體內(nèi)H2S的下調(diào)可能與門(mén)靜脈高壓癥的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。
　　 4．表明內(nèi)源性硫化氫參與了門(mén)靜脈高壓癥兔肝纖維的進(jìn)展，兔肝內(nèi)H2S的減少主要與肝組織CSE酶活性減弱和表達(dá)減少有關(guān)，可能在門(mén)靜脈高壓癥的發(fā)生機(jī)制中發(fā)揮重要作用，并對(duì)維持門(mén)靜脈高壓癥有一