ACA陽性先兆流產(chǎn)與CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的關(guān)系及安子合劑干預(yù)作用研究.pdf

1、目的:
　　 1.臨床試驗:通過檢測ACA陽性先兆流產(chǎn)患者治療前后外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的比例,觀察安子合劑對ACA陽性先兆流產(chǎn)患者外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的影響,從臨床方面探討ACA陽性先兆流產(chǎn)的免疫病理機制及安子合劑的免疫調(diào)節(jié)機理。
　　 2.動物實驗:通過檢測ACA導(dǎo)致妊娠丟失動物模型孕鼠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞比例,觀察安子合劑對ACA導(dǎo)致

2、妊娠丟失動物模型孕鼠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的影響,從實驗方面探討ACA導(dǎo)致妊娠丟失的免疫病理機制及安子合劑的免疫調(diào)節(jié)機理。
　　 方法:
　　 1.臨床試驗:①選取27例ACA陽性先兆流產(chǎn)患者及15例正常孕婦為觀察對象,用流式細(xì)胞儀檢測兩組外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的比例,比較ACA陽性先兆流產(chǎn)患者治療前與正常孕婦外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞比例的差異。

3、②用流式細(xì)胞儀檢測27例ACA陽性先兆流產(chǎn)患者經(jīng)安子合劑治療后外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的比例,觀察治療前后外周血CD4+CD25+FOXP3+Tr-eg細(xì)胞比例的變化。③用ELISA法測定安子合劑治療前后ACA定量和定性指標(biāo),觀察ACA的變化。④根據(jù)中醫(yī)證候分級量化及評分標(biāo)準(zhǔn),記錄安子合劑治療前后腹痛、腰酸、陰道出血等先兆流產(chǎn)臨床癥狀的積分變化,評價中醫(yī)證候的改善情況;動態(tài)檢測安子合劑治療期間血清E2、P、β-H

4、CG值及B超檢查孕囊大小、形態(tài)及胎心搏動等的變化,評價胚胎發(fā)育情況。⑤根據(jù)臨床綜合療效評定標(biāo)準(zhǔn),評價安子合劑的臨床綜合療效。
　　 2.動物實驗:①將動物隨機分為6組:空白對照組、模型組、安子合劑低劑量組、安子合劑中劑量組、安子合劑高劑量組、阿司匹林組。觀察陰道脫落細(xì)胞涂片及陰栓,來確定妊娠日。②通過給孕鼠腹腔注射ACA-IgG/NH-IgG,建立動物模型。③用流式細(xì)胞儀檢測各組孕鼠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)

5、胞的比例,比較各組細(xì)胞比例的差異。④用ELISA法測定各組孕鼠外周血ACA的滴度,觀察各組ACA滴度的變化。⑤常規(guī)組織病理切片,觀察各組子宮蛻膜、胎盤組織病理變化:免疫組化檢測各組母胎界面上FOXP3、C3、TNF-α、IgG的表達(dá),觀察各組胚胎吸收率及胎鼠發(fā)育情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.臨床試驗:
　　 1.1.ACA陽性先兆流產(chǎn)患者治療前CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的比例顯著低于正常妊娠對照

6、組(P＜0.01)。
　　 1.2.安子合劑治療后,ACA陽性先兆流產(chǎn)患者外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的比例顯著高于治療前(P＜0.01)。
　　 1.3.安子合劑治療后,27例患者中20例ACA定性指標(biāo)-ACA陽性的轉(zhuǎn)陰率達(dá)85.00％,7例ACA定量指標(biāo)-ACA滴度較治療前顯著下降(P＜0.01)。
　　 1.4.安子合劑治療后,27例ACA陽性先兆流產(chǎn)患者,B超植25例可見胎心搏動,21

7、例胎兒成形,保胎的成功率為92.59％。
　　 1.5.安子合劑治療后,先兆流產(chǎn)中醫(yī)證候明顯改善,治愈率33.33％,顯效率33.33％,總有效率88.89％;臨床綜合療效為痊愈率84.00％,好轉(zhuǎn)率14.81％,總有效率92.59％。
　　 2.動物實驗:
　　 2.1.成功復(fù)制了ACA導(dǎo)致妊娠丟失的動物模型。
　　 2.2.模型動物外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的比例較空白對照組顯著

8、下降(P＜0.01);與模型組相比,安子合劑低、中、高劑量組、阿司匹林組均能顯著升高CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的比例(P＜0.01),其中安子合劑低劑量組療效優(yōu)于中、高劑量組和阿司匹林組(P＜0.01)。
　　 2.3.與模型組相比,安子合劑低、中劑量組、阿司匹林組能顯著降低模型動物外周血ACA的滴度(P＜0.01),,安子合劑低劑量組療效優(yōu)于于中劑量組和阿司匹啉組(P＜0.01)。
　　 2.4.安子合

9、劑中、低劑量組及阿司匹林組能明顯改善模型動物母胎界面上免疫復(fù)合物的沉積、血栓病灶、壞死區(qū)域等病理變化。
　　 2.5.安子合劑低、中劑量組、阿司匹林組都能增加模型動物母胎界面上FOXP3的表達(dá)(P＜0.01),安子臺劑低劑量組優(yōu)于中劑量組和阿司匹林組(P＜0.01)。
　　 2.6.安子合劑低、中、高劑量組、阿司匹林組都能減少模型動物母胎界面上C3、IgG、TNF-α,的沉積(P＜0.05),安子合劑低劑量組療效優(yōu)于中、

10、高劑量組和阿司匹林組(P＜0.01)。
　　 2.7.安子合劑低劑量組、阿司匹林組能顯著降低模型動物胚胎吸收率,顯著增加模型動物胎鼠、胎盤重量(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.臨床研究表明,ACA陽性先兆流產(chǎn)患者外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的比例低于正常妊娠婦女,存在免疫調(diào)節(jié)異常;中藥安子合劑治療ACA陽性先兆流產(chǎn)的作用機理之一與增加CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的比例、

11、調(diào)節(jié)妊娠期機體免疫功能有關(guān)。
　　 2.實驗研究表明,ACA導(dǎo)致妊娠丟失的病理機制之一是機體免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞-CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞比例的減少,免疫調(diào)節(jié)功能紊亂,免疫復(fù)合物沉積于母胎界面,引起補體C3過度激活,誘導(dǎo)TNF-α等炎性細(xì)胞聚集并活化,引起母胎界面組織損傷,母體對胚胎排斥,導(dǎo)致妊娠丟失。安子合劑ACA導(dǎo)致妊娠丟失的免疫調(diào)節(jié)機制是通過增加CD4+CD25+FOXP3+Treg細(xì)胞的比例來實現(xiàn)的,其作用的強