流產(chǎn)婦女自身抗體與CD4+CD25+Foxp3+T細胞的關(guān)系及強的松治療對其的影響.pdf

1、目的:目前臨床上對流產(chǎn)的病因診斷中，免疫性因素受到越來越多的關(guān)注?，F(xiàn)代生殖免疫學(xué)認為，成功的妊娠是一種外周免疫耐受，母體對胎兒的免疫耐受使得妊娠得以維持，直至分娩。如果這種耐受平衡被打破，就可能導(dǎo)致流產(chǎn)或不孕。自身抗體陽性已成為流產(chǎn)的常見病因，因此，檢測自身抗體也成為常用的一種診斷手段。檢測的自身抗體主要包括抗精子抗體(anti-sperm antibody，AsAb)、抗子宮內(nèi)膜抗體抗(anti-endometriaantibody，

2、EMAb)和抗心磷脂抗體(anticardiolipin antibody，AcA)。對自身抗體陽性者多采用小劑量免疫抑制劑---糖皮質(zhì)激素（強的松）和阿司匹林進行聯(lián)合治療。
　　CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞（Regulatory T cells，Tregs）是近年來確定的一類具有免疫抑制功能的輔助性T細胞亞群，具有維持自身免疫平衡、負調(diào)控免疫應(yīng)答的功能。細胞內(nèi)叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子-3(forkhead/winged-helixtra

3、nscription factor，F(xiàn)oxp3)是參與Tregs分化、發(fā)育的關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子，可以抑制IL-2基因轉(zhuǎn)錄、活化。CD4+ CD25+ Foxp3+T細胞可以通過非抗原特異性方式，抑制CD4+與CD8+T細胞增殖和分泌細胞因子，抑制樹突狀細胞和單核細胞功能，從而發(fā)揮免疫抑制作用，也可以通過分泌細胞因子，如轉(zhuǎn)化生長因子β(Transforming growth factor-be-ta，TGF-β，)等發(fā)揮免疫抑制功能。目前CD4

4、+ CD25+ Foxp3+T細胞在自身免疫性疾病中的作用日益受到重視，有關(guān)CD4+ CD25+ Foxp3+T細胞在妊娠中發(fā)揮重要作用的報道也越來越多。本研究通過流式細胞儀檢測自身抗體陽性的流產(chǎn)婦女外周血中CD4+CD25+ Foxp3+T細胞的數(shù)量，觀察糖皮質(zhì)激素治療前后，CD4+ CD25+Foxp3+T細胞的數(shù)量變化，探討CD4+ CD25+ Foxp3+T細胞與流產(chǎn)的相關(guān)性，為流產(chǎn)和不孕不育的治療提供新的思路，為開發(fā)有針對性治

5、療流產(chǎn)或不孕不育的新方法提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1、研究對象：
　　1.1流產(chǎn)組
　　30例于2012年9月至2014年2月期間在河北醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科就診的女性患者。所有研究對象均至少有過一次早期流產(chǎn)或胎停育經(jīng)歷，排除了染色體、激素、器官性疾病、感染等因素，B超監(jiān)測排卵功能正常，男方各項檢查均正常，經(jīng)ELISA方法定性檢測AsAb(IgM)、EMAb(IgM)和AcA(IgM)三項抗體中至少

6、有一項為陽性，符合以上條件者即選入流產(chǎn)組。
　　1.2治療組
　　30例流產(chǎn)婦女（年齡與流產(chǎn)組相近，入選條件同流產(chǎn)組），經(jīng)強的松治療后，AsAb(IgM)、EMAb(IgM，IgG)和AcA(IgM，IgG)均為陰性者。
　　1.3正常對照組
　　30例年齡與流產(chǎn)組及治療組相匹配的經(jīng)產(chǎn)健康婦女。
　　2、方法：
　　2.1采集所有研究對象的抗凝靜脈血及血清。
　　2.2首先采用ELISA方法定性

7、測定所有研究對象血清中AsAb(IgM)、EMAb(IgM，IgG)和AcA(IgM，IgG)。試劑由深圳安群公司提供，檢測過程均按說明書嚴格操作，酶標儀于450 nm處測定各孔OD值，樣品孔OD值/臨界值≥1判斷為陽性。然后采用ELISA方法定量檢測三組的AsAb(IgM)、EMAb(IgM)和AcA(IgM)水平，試劑由美國TSZ公司提供。
　　2.3采用密度梯度離心法分離各組外周血單個核細胞(peripheril blood

8、mononuclear cell，PBMC)，經(jīng)流式細胞儀檢測三組PBMC中CD4+T細胞、CD4+ CD25+ Foxp3+T細胞、CD4+ Foxp3+T細胞、CD4+ CD25+T細胞的數(shù)量。
　　結(jié)果:
　　1、各組婦女血清中AsAb(IgM)、EMAb(IgM)和AcA(IgM)的水平
　　流產(chǎn)組婦女血清中AsAb(IgM)水平(29.45±6.98 pg/ml)、EMAb(IgM)水平(304.10±17.

9、69 pg/ml)和AcA(IgM)水平(182.90±10.94 U/ml)均明顯高于正常對照組(5.73±1.30 pg/ml)、(50.20±5.71 pg/ml)和(36.18±3.85 U/ml)（均P＜0.01）。治療組婦女血清中AsAb(IgM)水平(6.69±1.69 pg/ml)、EMAb(IgM)水平(79.22±6.71 pg/ml)和AcA(IgM)水平(52.23±5.01 U/ml)均明顯低于流產(chǎn)組（均P＜0

10、.01）。
　　2、各組婦女PBMC中CD4+T細胞、CD4+ CD25+ Foxp3+T細胞、CD4+Foxp3+T細胞和CD4+ CD25+T細胞的數(shù)量。
　　2.1各組婦女PBMC中CD4+T細胞的比例
　　流產(chǎn)組婦女PBMC中CD4+T細胞的比例(28.42±10.01％)與正常對照組(33.69±14.42％)及治療組（31.04±11.02％）比較均無統(tǒng)計學(xué)差異;治療組與正常對照組亦無統(tǒng)計學(xué)差異。
　

11、　2.2各組婦女PBMC中CD4+ CD25+ Foxp3+T細胞在CD4+T細胞中的比例
　　流產(chǎn)組婦女PBMC中CD4+ CD25+ Foxp3+T細胞在CD4+T細胞中的比例（1.12±1.22％）明顯低于正常對照組（5.22±3.09％）(P＜0.01)，治療組（1.40±0.82％）與流產(chǎn)組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），治療組明顯低于正常對照組(P＜0.01)。
　　2.3各組婦女PBMC中CD4+ Foxp3

12、+T細胞在CD4+T細胞中的比例
　　流產(chǎn)組婦女PBMC中CD4+Foxp3+T細胞在CD4+T細胞中的比例（1.34±1.88％）明顯低于正常對照組（6.67±5.35％）(P＜0.01);治療組CD4+ Foxp3+T細胞比例（3.15±3.21％）明顯高于流產(chǎn)組(P＜0.01)，但仍明顯低于正常對照組(P＜0.01)。
　　2.4各組婦女PBMC中CD4+ CD25+T細胞在CD4+T細胞中的比例
　　流產(chǎn)組婦女

13、PBMC中CD4+ CD25+T細胞在CD4+T細胞中的比例(5.39±3.78％)明顯低于正常對照組（7.44±2.48％）(P＜0.01)，但與治療組(7.01±4.31％)比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3、流產(chǎn)組婦女外周血中CD4+ CD25+ Foxp3+T細胞數(shù)量與自身抗體的相關(guān)性分析
　　流產(chǎn)組婦女PBMC中CD4+ CD25+ Foxp3+T細胞數(shù)量與抗精子抗體AsAb(IgM)和抗心磷脂抗體AcA(

14、IgM)水平均無明顯相關(guān)性;抗子宮內(nèi)膜抗體EMAb(IgM)與CD4+ CD25+ Foxp3+T細胞數(shù)量之間存在負相關(guān)趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)差異水平。
　　結(jié)論:
　　1、流產(chǎn)組婦女血清中抗精子抗體AsAb(IgM)水平、抗子宮內(nèi)膜抗體EMAb(IgM)水平和抗心磷脂抗體AcA(IgM)水平均明顯升高，經(jīng)強的松治療后這三種自身抗體的水平明顯降低。
　　2、流產(chǎn)組婦女外周血PBMC中CD4+ CD25+ Foxp3+T細