安子合劑對ACA陽性流產(chǎn)JAK-STAT3信號通路的影響.pdf

1、目的:
　　本課題通過建立抗心磷脂抗體(ACA)陽性流產(chǎn)小鼠模型，觀察安子合劑對于ACA陽性流產(chǎn)小鼠胎盤及蛻膜JAK/STAT3信號通路的影響，從細(xì)胞增殖的角度探討安子合劑治療ACA陽性流產(chǎn)的病理機(jī)制，為安子合劑治療ACA陽性流產(chǎn)提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.將BALB/C小鼠隨機(jī)分為5組:空白對照組、模型組、安子合劑低、高劑量組和阿司匹林組。將人β2-GPⅠ溶于無菌PBS中，調(diào)整濃度為100ug/0.

2、25ml，模型組、安子合劑低、高劑量組、阿司匹林組第1天于腹腔注射人β2-GPⅠ與CFA1∶1比例混合液50ul，空白對照組注射生理鹽水50ul;第8天以IFA代替CFA加強(qiáng)免疫1次;第18天將各組雌性與雄性小鼠1∶1合籠，以見到陰栓為妊娠第0天。在妊娠第15天時處死孕鼠，摘眼球取血，計算胚胎丟失率，采用ELISA方法檢測外周血ACA、IL-6滴度。
　　2.取新鮮胎盤、蛻膜組織，用生理鹽水漂洗數(shù)次，加入相應(yīng)體積的裂解液進(jìn)行勻漿，

3、裂解后，離心取上清液;以ELISA方法檢測母胎界面絨毛及蛻膜ACA、IL-6濃度。
　　3.取胎盤、蛻膜組織用多聚甲醛固定，石蠟包埋切片。采用免疫組化的方法測定母胎界面胎盤及蛻膜JAK、GP130、SOCS、P-STAT3、PCNA含量。
　　4.取凍存胎盤、蛻膜組織，采用Westen-blot方法檢測母胎界面胎盤及蛻膜P-STAT3及STAT3含量。
　　結(jié)果:
　　1.本研究采用β2-GPⅠ免疫小鼠，較以往造

4、模方法更為穩(wěn)定。模型組胚胎丟失率、血ACA滴度均明顯高于空白對照組(P＜0.05)，證明造模成功。
　　2.低、高劑量安子合劑、阿司匹林均能顯著降低胚胎丟失率(P＜0.05);安子合劑低、高劑量組胚胎丟失率與阿司匹林相當(dāng)(p＞0.05)。
　　3.模型組血清、胎盤、蛻膜ACA滴度較空白對照組明顯升高(P＜0.01);低、高劑量安子合劑、阿司匹林可以明顯降低小鼠血清、胎盤及蛻膜ACA滴度(P＜0.01)。安子合劑低、高劑量組療

5、效與阿司匹林相當(dāng)。
　　4.模型組血清IL-6滴度較空白對照組明顯升高(P＜0.01);高劑量安子合劑能降低降低IL-6滴度(P＜0.05);安子合劑低劑量組、阿司匹林組IL-6滴度與模型組相比無顯著性差異(P＞0.05)。各組胎盤及蛻膜IL-6滴度均無顯著性差異(P＞0.05)
　　5.模型組胎盤及蛻膜JAK較空白對照組明顯下降(P＜0.05);阿司匹林可以明顯升高模型小鼠胎盤及蛻膜JAK水平(P＜0.05);低、高劑量安

6、子合劑可以升高胎盤JAK水平(P＜0.05)，對蛻膜JAK無影響(P＞0.05)。
　　6.模型組胎盤及蛻膜GP130較空白對照組明顯下降(P＜0.05);阿司匹林可以明顯升高胎盤及蛻膜GP130(P＜0.01);高劑量安子合劑使蛻膜GP130升高(P＜0.01);但低劑量對GP130無影響(P＞0.05)。
　　7.各組小鼠胎盤及蛻膜SOCS無改變(P＞0.05)。
　　8.模型組p-STAT3較空白對照組明顯下降(

7、P＜0.01);低、高劑量安子合劑及阿司匹林均可明顯升高胎盤及蛻膜p-STAT3水平(P＜0.01);安子合劑低、高劑量組與阿司匹林組療效相當(dāng)。
　　9.模型組PCNA較空白對照組明顯下降(P＜0.05);低、高劑量安子合劑及阿司匹林均可明顯升高胎盤及蛻膜PCNA水平(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　ACA導(dǎo)致妊娠丟失的病理機(jī)制之一是ACA可以直接作用于母胎界面胎盤及蛻膜JAK/STAT3信號通路，使相關(guān)蛋白表達(dá)下降

8、，降低滋養(yǎng)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞增殖活性，從而引起母胎界面組織損傷，導(dǎo)致妊娠丟失。
　　阿司匹林可以使母胎界面JAK/STAT3信號通路相關(guān)蛋白JAK、GP130、STAT3表達(dá)升高，但對血清IL-6及母胎界面IL-6、SOCS無影響，證明阿司匹林治療ACA陽性流產(chǎn)的機(jī)制是通過活化JAK/STAT3信號通路，促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞的增殖來實(shí)現(xiàn)的。
　　安子合劑可以升高胎盤JAK、促進(jìn)胎盤及蛻膜STAT3的表達(dá)，促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞

9、增殖，對血清IL-6及母胎界面IL-6、GP130、SOCS的影響并不明顯，我們認(rèn)為:安子合劑和阿司匹林治療ACA陽性流產(chǎn)的機(jī)制同樣可能是通過活化JAK/STAT3信號通路、促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞及蛻膜增殖來實(shí)現(xiàn)，而且都不是通過IL-6信號途徑激活JAK/STAT3信號通路。鑒于信號通路的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系及其受多種細(xì)胞因子的影響，以及中藥復(fù)方的多靶點(diǎn)的特性，我們考慮可能有其他因子甚至信號途徑參與了JAK/STAT3信號通路的變化，其作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究