當(dāng)歸紅芪提取物對(duì)糖尿病腎病大鼠腎組織NF-KB、TNF-a表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本課題復(fù)制糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）大鼠模型采用一次性大劑量（60mg·kg-1）對(duì)wistar大鼠空腹腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ)的方法，觀察當(dāng)歸紅芪提取物對(duì)DN大鼠腎組織的病理改變及DN大鼠腎組織中NF-κB信號(hào)通路相關(guān)基因和蛋白等的影響，探討當(dāng)歸紅芪提取物對(duì)DN大鼠的作用及產(chǎn)生該作用可能的機(jī)制。
　　方法：90只SPF級(jí)wistar雄性大鼠，體重160±20g，適應(yīng)環(huán)境喂養(yǎng)1周，按隨機(jī)

2、數(shù)字表抽取12只為正常組，剩下的大鼠則采用一次性空腹腹腔注射STZ60mg·kg-1，正常組大鼠注射相等劑量的檸檬酸鈉緩沖液（0.1mol/L），三天之后大鼠尾靜脈采血，如果測(cè)得的空腹血糖值≥16.7mmol·L-1，21天之后檢測(cè)24h尿蛋白，若該值＞30mg，就標(biāo)志著DN造模成功。把造模時(shí)體重未達(dá)標(biāo)的大鼠以及沒有達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)的大鼠18只剔除，剩余成模大鼠隨機(jī)分為5組：模型組、當(dāng)歸紅芪高劑量組、當(dāng)歸紅芪中劑量組、當(dāng)歸紅芪低劑量組、西藥

3、組，每組為12只。分組后開始灌胃給藥，每日一次，當(dāng)歸紅芪低、中、高劑量組分別以1.8g·kg-1·d-1、3.6g·kg-1·d-1、7.2g·kg-1·d-1等不同劑量給藥，西藥組以17.5mg·kg-1·d-1劑量予厄貝沙坦灌胃，正常組和模型組用等量的超純水灌胃，持續(xù)給藥8周。所有大鼠均使用常規(guī)飼料飼養(yǎng)，提供充足的飼料和水。在給藥的第4周和第8周末，對(duì)除正常組外的各組大鼠進(jìn)行12小時(shí)斷食但不斷水的處理，之后檢測(cè)大鼠24小時(shí)尿蛋白定量

4、；8周末稱大鼠的體重，把大鼠固定在鼠架，股動(dòng)脈取血；取大鼠雙腎，然后稱腎臟重量，算出大鼠腎肥大指數(shù)；甲醛液浸泡、冰凍保存腎臟，用于光鏡下腎臟病理形態(tài)學(xué)的觀察，免疫組化法檢測(cè)腎組織中NF-κB、TNF-α蛋白的表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)法檢測(cè)腎組織中NF-κB、TNF-αmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠一般情況：正常組大鼠狀態(tài)較好，而DN各組大鼠毛發(fā)粘連晦暗，神情萎靡，易怒，活動(dòng)度明顯下降，大便稀溏、難

5、成形，進(jìn)食、飲水量明顯增加，尿量亦增多明顯，體重快速下降。用藥治療后，各組治療組大鼠與模型組大鼠比較癥狀明顯緩解。
　　2.各組大鼠體重，腎肥大指數(shù)的對(duì)比：與正常組比較，模型組大鼠體重有明顯的下降趨勢(shì)（P＜0.01）；與模型組比較，各治療組大鼠體重均有不同程度的回升，其中中藥中劑量組回升明顯高于其它各治療組，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與正常組比較，模型組大鼠腎臟均顯著增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與模型組比較

6、，各治療組大鼠腎重指數(shù)均有不同程度降低，其中中藥中、高劑量組和西藥組下降最為明顯(P＜0.05)；各治療組大鼠腎重指數(shù)之間差異較小(P＞0.05)。
　　3.各組大鼠24h尿蛋白的對(duì)比：與正常組對(duì)比，模型組大鼠24h尿蛋白定量有顯著的增高趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組比較，各治療組大鼠24h尿蛋白定量均有不同程度的降低，其中中藥中、高劑量組和西藥組下降最為顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；各治療組之間比較，

7、西藥組低于中藥低劑量組，且兩者之間存在著明顯的差異(P＜0.05)。
　　4.各組大鼠FBG的變化：與正常組比較，模型組大鼠的FBG有顯著增高趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組比較，各治療組之間大鼠的FBG均有不同程度的下降（P＜0.05），其中中藥各劑量組下降均較為顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；西藥和中藥各組間相比，中藥中、高劑量組小于西藥組，且前者與后兩者之間亦存在顯著的差異(P＜0.05)。
　

8、　5.各組大鼠血脂的變化：與正常組比較，模型組大鼠的膽固醇顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，各治療組大鼠膽固醇均呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，以中藥中、高兩劑量組降低趨勢(shì)最為顯著（P＜0.05）；與正常組比較，模型組大鼠甘油三酯顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與模型組比較，中藥各組和西藥組大鼠的甘油三酯均略有下降(P＜0.05)；各治療組之間比較，中藥中劑量組與西藥組之間存在著明顯的差異(P＜0.05)。
　

9、　6.各組大鼠腎功能的變化：與正常組比較，模型組大鼠的血肌酐有著顯著的升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組對(duì)比，各治療組大鼠血肌酐均有所降低，以中藥中、高兩劑量組降低的最為顯著（P＜0.05）；各治療組大鼠血肌酐之間差異較小(P＞0.05)。與正常組比較，模型組大鼠的尿素氮升高較為明顯(P＜0.05)；和模型組比較，中藥中劑量組大鼠尿素氮下降較為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；各治療組之間比較，無明顯差異(P＞0.0

10、5)。
　　7.腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察：HE染色中可見：正常組大鼠腎小球大小正常，基底膜無增厚現(xiàn)象，未見系膜基質(zhì)的增生，腎小管無炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，腎間質(zhì)亦無纖維組織增生。模型組中，腎小球體積增大，可見基底膜厚度增加，系膜增生，間質(zhì)區(qū)可見炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性；與模型組比較，各治療組均有不同程度的恢復(fù)。
　　8.各組大鼠腎組織NF-κB、TNF-α的基因表達(dá)：和正常組比較，模型組大鼠腎組織NF-κB基因的表達(dá)顯著

11、升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，各治療組大鼠腎組織NF-κB mRNA量都有所減少，以中藥中、高兩劑量組及西藥組下降最為顯著（P＜0.05）；各治療組進(jìn)行比較，西藥組和中藥中劑量組兩組之間存在著明顯的差異(P＜0.05)。和正常組比較，模型組大鼠腎組織TNF-α基因的表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與模型組比較，各治療組大鼠腎組織TNF-αmRNA均有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；各治療

12、組之間比較，不存在著明顯的差異(P＞0.05)。
　　9.各組大鼠腎組織NF-κB、TNF-α的蛋白表達(dá)：與正常組對(duì)比，模型組大鼠腎組織NF-κB、TNF-α有明顯升高趨勢(shì)（P＜0.01）；與模型組對(duì)比，各治療組腎組織NF-κB、TNF-α均有明顯降低趨勢(shì)(P＜0.05)。各治療組之間比較，西藥組和中藥低劑量組有著顯著的差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.當(dāng)歸紅芪提取物可以降低DN大鼠的24h尿蛋白量，下調(diào)血肌