紅芪多糖對糖尿病腎病db-db小鼠腎組織GluT-1、FN和Col-IV表達的影響.pdf

1、目的:探討紅芪多糖(Hedysaryum Polysaccharide, HPS)保護糖尿病腎病db/db小鼠腎功能的作用機制和對腎臟組織中葡萄糖轉運蛋白-1(Glucose Tansporter-1, GluT-1)、纖維連接蛋白( fibronectin, FN)和IV型膠原(collagen IV, Col-IV)mRNA和蛋白表達的影響,闡明其可能機制。
　　方法:采用11周齡雄性SPF級2型糖尿病腎病動物模型db/db小

2、鼠50只和db/m小鼠10只。適應性喂養(yǎng)1周后稱體重,檢測血糖和尿微量白蛋白(urinary microalbumin, UMALB),確診db/db小鼠發(fā)生早期糖尿病腎病后進入實驗。把50只db/db小鼠隨機分成5組:模型組,給予生理鹽水0.2 ml.d-1;依那普利組,給予依那普利10 mg.kg-1.d-1;HPS低劑量組,給予HPS100 mg.kg-1.d-1;HPS中劑量組,給予HPS200 mg.kg-1.d-1;HPS高

3、劑量組,給予HPS400 mg.kg-1.d-1。10只db/m小鼠作為正常對照組,給予生理鹽水0.2 ml.d-1。以上均每日灌胃1次,連續(xù)8周。于第8周處死前所有小鼠置代謝籠留取24h尿液,計量后用于測定 UMALB。稱重后摘眼球取血標本,用于血肌酐(serum creatinine, SCR)、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)檢測。小鼠處死后立即取腎臟組織,分離皮、髓質。左腎放于-80℃冰箱中保存,用于

4、RT-PCR和Western blotting檢測;右腎立即用石蠟包埋,切片后行免疫組化和HE及Masson染色。用苦味酸法測定SCR水平;酶偶聯速率法測定BUN水平;ELISA法測定24h UMALB;RT-PCR法測定GluT-1、FN和 Col-IV mRNA的表達;Western blloting法和免疫組化法測定 GluT-1、FN和Col-IV蛋白的表達。
　　結果:(1)腎功能檢測:依那普利組、HPS各劑量組小鼠SC

5、R、BUN的值和治療后UMALB的值均低于模型組,HPS中高劑量組和依那普利組降低明顯(P<0.01)。
　　(2)小鼠腎臟GluT-1的表達:依那普利組小鼠腎組織中GluT-1的表達低于模型組(P<0.05或P<0.01);HPS高劑量小鼠腎臟組織中GluT-1蛋白的表達明顯低于模型組(P<0.01)。
　　(3)小鼠腎臟FN的表達:依那普利組和HPS高劑量組小鼠腎臟組織中FN的表達均明顯低于模型組(P<0.01); HP

6、S中低劑量組小鼠腎臟組織 mRNA和蛋白質的表達均低于模型組(P<0.05或P<0.01)。
　　(4)小鼠腎臟Col-IV的表達:依那普利組和HPS各組小鼠腎臟組織中Col-IV的表達均低于模型組,依那普利差異明顯(P<0.01)。隨著HPS劑量的增加,腎臟組織棕色顆粒染色面積逐漸減小。
　　(5)腎臟組織HE染色:各治療組小鼠腎小球結構紊亂程度、毛細血管分布、腎小管走形、管腔通暢度及腎間質的炎癥細胞浸潤均明顯好于模型組。

7、隨著 HPS劑量的增加,腎臟病變程度逐漸減輕。
　　(6)腎臟組織 MASSON染色:各治療組小鼠腎小球結構破壞程度、毛細血管紊亂程度、腎小管管腔通暢度及膠原纖維在腎臟的分布和表達均明顯好于模型組。隨著HPS劑量的增加,膠原纖維在腎臟的表達和分布逐漸減少。
　　(7)腎臟組織電鏡檢測:各治療組小鼠腎小球內皮細胞、系膜細胞、足細胞和腎小管上皮細胞的形態(tài)及細胞器、絨毛等微結構均明顯好模型組。HPS高劑量組和依那普利組相比,兩者之