db-db自發(fā)性糖尿病小鼠頜下腺PCNA、EGFR、p53表達(dá)及細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用光鏡、免疫組織化學(xué)技術(shù)及原位末端標(biāo)記法觀察db/db糖尿病小鼠頜下腺的病理形態(tài)學(xué)改變，表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)、增殖細(xì)胞核抗原(Proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)、p53基因，在糖尿病小鼠頜下腺中的表達(dá)以及凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率的變化，了解糖尿病時(shí)小鼠頜下腺的變化，為糖尿病臨床治療及基礎(chǔ)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：引進(jìn)日本C5

2、7BL/ksi-db/+m表型正常隱性基因小鼠，飼養(yǎng)于無(wú)菌包中，自由攝水、飲食，近親(兄妹)交配，其純合子后代，即為db/db(單基因遺傳自然發(fā)病型)糖尿病小鼠。自小鼠生后4周起，由尾靜脈取血檢測(cè)血糖，平均血糖值高達(dá)10mmol/L以上且同時(shí)伴發(fā)肥胖者確定為db/db糖尿病鼠，選取3、4、6、8、10月齡db/db糖尿病小鼠及相應(yīng)月齡的db/+m正常小鼠作為對(duì)照組。4％多聚甲醛灌流固定，取頜下腺，4％多聚甲醛后固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切

3、片，HE染色。應(yīng)用SP免疫組織化學(xué)方法對(duì)EGFR、.PCNA、p53三種相應(yīng)抗原進(jìn)行標(biāo)記，應(yīng)用TUNEL方法對(duì)凋亡細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，計(jì)算機(jī)系統(tǒng)進(jìn)行圖象分析，統(tǒng)計(jì)EGFR、PCNA、p53在頜下腺組織內(nèi)表達(dá)的細(xì)胞陽(yáng)性率以及腺體內(nèi)凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性率。同時(shí)，光鏡下觀察三種抗原及凋亡細(xì)胞在頜下腺各部位的表達(dá)和分布情況。數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用析因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)方差分析。當(dāng)因素間有交互作用時(shí)，分析主因素的作用采用Duncan極差檢驗(yàn)，進(jìn)行兩兩比較，因素間無(wú)交互作

4、用時(shí)，采用q檢驗(yàn)做兩兩均數(shù)的比較。 結(jié)果：隨著糖尿病發(fā)展，頜下腺組織萎縮，腺泡細(xì)胞縮小，排列不整齊，形態(tài)不規(guī)則。頜下腺間質(zhì)增生，可見(jiàn)纖維增多。免疫組織化學(xué)顯示，PCNA、EGFR、p53及凋亡細(xì)胞在對(duì)照組及糖尿病組頜下腺中均有表達(dá)或分布。在db/db糖尿病小鼠頜下腺PCNA細(xì)胞陽(yáng)性率隨病程延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，且明顯低于對(duì)照組；EGFR、p53細(xì)胞陽(yáng)性率均呈增高趨勢(shì)，且顯著高于對(duì)照組；凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率隨病程延長(zhǎng)呈增高趨勢(shì)，且與同齡對(duì)照組

5、相比明顯增高。 結(jié)論：db/db糖尿病可導(dǎo)致頜下腺組織萎縮及實(shí)質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。隨著病程延長(zhǎng)，PCNA表達(dá)逐漸減少，EGFR、p53表達(dá)增多。PCNA逐漸減少，說(shuō)明頜下腺的增殖活動(dòng)隨病情發(fā)展逐漸減弱；EGFR表達(dá)增多，說(shuō)明糖尿病時(shí)EGFR作為多效應(yīng)受體，可能被激活從而誘導(dǎo)了頜下腺的細(xì)胞凋亡；p53表達(dá)的上升，提示隨著糖尿病發(fā)展，頜下腺實(shí)質(zhì)細(xì)胞有凋亡趨勢(shì)。凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率隨糖尿病病程延長(zhǎng)而增加顯著，這與p53表達(dá)的增強(qiáng)相一致，可能是