鷹嘴豆α-葡萄糖苷酶抑制肽的酶法制備及其穩(wěn)定性初探.pdf

1、鷹嘴豆蛋白具有過敏性低、生物效價高、人體消化吸收率高等優(yōu)點，且其含有人體所需的多種氨基酸、蛋白質、維生素等，是一種不可多得的優(yōu)質植物蛋白資源，同時還具有降血壓、血糖、高血脂及膽固醇的作用，特別適合“三高”人群食用。目前對鷹嘴豆的研究主要集中在蛋白改性、理化性質及初加工技術等方面，主要還是作為蒸煮食用、干制品等傳統(tǒng)產(chǎn)品，缺乏深加工技術，資源利用率低。因此，加大對鷹嘴豆及其產(chǎn)品的開發(fā)力度具有巨大前景和重要意義。
　　近年來，隨著生活壓

2、力和飲食的不規(guī)律導致越來越多的人患上糖尿病，而我國是全球糖尿病患者人數(shù)最多的國家，防治糖尿病已刻不容緩。α-葡萄糖苷酶抑制劑作為新型口服降血糖治療藥物，已經(jīng)廣泛地應用于Ⅱ型糖尿病患者餐后血糖的控制，但市場上α-葡萄糖苷酶抑制劑類的藥物，雖然治療效果較好，但價格較高且存在毒副作用，所以，從動植物中開發(fā)出具有高效低毒價廉的天然α-葡萄糖苷酶抑制劑便成了糖尿病治療藥物和功能性食品的研發(fā)熱點。
　　本論文以鷹嘴豆蛋白為原料，對鷹嘴豆蛋白的

3、酶解工藝、α-葡萄糖苷酶抑制肽的分離純化及其穩(wěn)定性進行了初步探究，主要研究結論如下：
　?。?）以α-葡萄糖苷酶抑制率和水解度為考察指標，選取了4種蛋白酶分別對鷹嘴豆蛋白進行水解，篩選出酶解效果最好的為堿性蛋白酶，其制備出的α-葡萄糖苷酶抑制肽抑制活性最高，可達到23.09％。在單因素實驗結果的基礎上，利用響應面試驗對鷹嘴豆蛋白酶解工藝進行優(yōu)化，得出的最佳酶解工藝參數(shù)為：酶解時間5.1h，酶解溫度57℃，底物濃度5.2%，pH10

4、.0，加酶量4000U/g，在此條件下，酶解制備得到α-葡萄糖苷酶抑制肽的抑制率高達31.86%。
　?。?）利用超濾對鷹嘴豆蛋白酶解液進行粗分離，得到小于3kDa和大于3kDa的兩個組分，其α-葡萄糖苷酶抑制率分別為47.53%和27.87%，可知小于3kDa組分抑制活性較好。然后將＜3kDa組分經(jīng)過SephadexG-25和SephadexG-10進一步分離純化，最終得到了抑制活性較高的峰2部分，其α-葡萄糖苷酶抑制率為59.

5、01%，與粗酶解液相比活性提高了1.85倍。將峰2部分進行了高分辨質譜分析，發(fā)現(xiàn)該部分的分子量大多數(shù)集中在200~300Da左右。對超濾得到的兩個組分進行氨基酸分析，發(fā)現(xiàn)小于3kDa部分的Cys、Leu、Phe和Pro含量明顯高于大于3kDa部分，其中Leu、Pro、Phe都是疏水性氨基酸，推測降血糖肽的活性可能與其氨基酸的疏水性有一定關系。
　?。?）以小于3kDa的鷹嘴豆多肽為研究對象，探究了溫度、pH、食品配料、防腐劑及金屬