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1、在病毒性疫苗的研究開(kāi)發(fā)工作中,人二倍體細(xì)胞作為病毒抗原的制備基質(zhì)是整個(gè)疫苗研發(fā)及生產(chǎn)質(zhì)量控制的首要選擇。對(duì)作為疫苗制備基質(zhì)的人二倍體細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性及其病毒感染生物學(xué)反應(yīng)特征的相關(guān)分析,將為病毒疫苗的研究及開(kāi)發(fā)包括疫苗安全性的研究提供更為豐富的資料。
從細(xì)胞生物學(xué)的角度看,細(xì)胞特定酶學(xué)反應(yīng)特征被認(rèn)為可以反映細(xì)胞的遺傳學(xué)特性和生物學(xué)性狀?,F(xiàn)有的資料表明,當(dāng)細(xì)胞面臨病毒感染時(shí),其具有天然免疫反應(yīng)性質(zhì)的生物學(xué)反應(yīng)事實(shí)上是與其自身的生
2、物學(xué)性狀相關(guān)的。其中細(xì)胞所產(chǎn)生的干擾素反應(yīng),在病毒疫苗制備技術(shù)工藝上又是一個(gè)具有重要意義的質(zhì)量指標(biāo),而該指標(biāo)與細(xì)胞增殖過(guò)程中的生物學(xué)活性狀態(tài)具有直接的相互聯(lián)系。因此,分析細(xì)胞酶活性特征與其在病毒感染時(shí)的干擾素反應(yīng)強(qiáng)度,顯然對(duì)這類細(xì)胞用于疫苗制備時(shí)的技術(shù)研究具有重要的意義。因此本文采用多種細(xì)胞系,多代細(xì)胞,通過(guò)生化方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶、琥珀酸脫氫酶的酶活力變化以鑒定細(xì)胞的穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,人胚肺二倍體細(xì)胞(KMB1
3、7細(xì)胞)和新型的人胚肺二倍體細(xì)胞(N0細(xì)胞)在細(xì)胞代次超過(guò)30代后,細(xì)胞內(nèi)的酶活力會(huì)發(fā)生一定的變化,乳酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶的酶活力上升,超氧化物歧化酶的酶活力下降,表明這兩種細(xì)胞在細(xì)胞代次超過(guò)30代后,細(xì)胞的增殖、代謝等能力會(huì)下降,細(xì)胞穩(wěn)定性較差,不利于用于疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)。Vero細(xì)胞和Hela細(xì)胞隨著細(xì)胞代次增加酶活力無(wú)明顯變化,表明這兩種細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)所采用的細(xì)胞代次內(nèi),細(xì)胞的增殖、代謝等能力基本保持穩(wěn)定。
本文重點(diǎn)分析了
4、各種酶活性指標(biāo)的變化與細(xì)胞在RNA病毒和DNA病毒感染時(shí)所產(chǎn)生的干擾素反應(yīng)的相互聯(lián)系,以及這些相互聯(lián)系所導(dǎo)致的病毒感染滴度的變化情況。做為在細(xì)胞核內(nèi)完成增殖和在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)完成增殖的HSV-1病毒和EV71病毒感染人胚肺二倍體細(xì)胞(KMB17、N0)時(shí),其引起IFN-α的相對(duì)表達(dá)量與細(xì)胞的酶活力、細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)有很大的關(guān)系。當(dāng)人胚肺二倍體細(xì)胞培養(yǎng)到第3天時(shí),細(xì)胞酶活力處于上升階段,細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)較好,當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)到第5天時(shí),細(xì)胞酶活力處于穩(wěn)定
5、狀態(tài),細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)也維持相對(duì)穩(wěn)定,兩種病毒感染培養(yǎng)到第5天細(xì)胞引起細(xì)胞分泌的IFN-α的相對(duì)表達(dá)量比感染培養(yǎng)到第3天細(xì)胞引起細(xì)胞分泌的IFN-α的相對(duì)表達(dá)量高,而病毒滴度在感染過(guò)程中逐漸上升,但隨著干擾素分泌的增加而其增殖逐漸變低的事實(shí),提示了人二倍體細(xì)胞在病毒增殖過(guò)程中所具有的容納限度,可能與干擾素的產(chǎn)生濃度相關(guān)。當(dāng)兩種病毒感染培養(yǎng)到第3天和第5天的Hela細(xì)胞時(shí),其引起細(xì)胞分泌的IFN-α的相對(duì)表達(dá)量與細(xì)胞的酶活力關(guān)系不大,且比感
6、染其他種類細(xì)胞分泌的IFN-α的相對(duì)表達(dá)量低,這提示了該細(xì)胞作為一種腫瘤細(xì)胞的非限制型特征。反之,兩種病毒感染培養(yǎng)到第3天的Vero細(xì)胞引起細(xì)胞分泌的IFN-α的相對(duì)表達(dá)量比感染培養(yǎng)到第5天細(xì)胞引起細(xì)胞分泌的IFN-α的相對(duì)表達(dá)量高,且病毒滴度前者也高于后者。這一特征有別于人二倍體細(xì)胞,似乎提示了Vero細(xì)胞的生物學(xué)特性,這些通過(guò)研究病毒感染后引起細(xì)胞分泌的IFN-α相對(duì)表達(dá)量的變化與細(xì)胞酶活力、細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)之間的關(guān)系的工作,雖然這需要
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