甘薯胚性懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中的體細(xì)胞無性系變異分析.pdf

1、Y 7 7 4 4 7 ：帝愛弓：督級(jí)：飛嚼蹇氣文普’碩士學(xué)位論文單位代鶘I { ) 0 1 9學(xué) 號(hào)：S 0 2 0 4 0甘薯胚性懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中的體細(xì)胞無性系變異分析S o m a c l o n a l V a r i a t i o n i nE m b r y o g e n i c S u s p e n s i o nC u l t u r e so f S w e e t p o t a t o 。I p o m o e

2、 ab a t a t a s ( L ．) L a m ．研 究 生： 鄞撞指 導(dǎo) 教 師：一割鏖昌 熬援申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別：一．壑堂亟±專 業(yè) 名 稱： 佐物遺佳直弛研 究 方 向： 苴薯緝照王捏皇盆王直牡所 在 學(xué) 院： 盔堂皇生物撞苤堂暄2 0 0 54 二5 月A b s t r a c tE m b r y o g e n i c s u s p e n s i o nc u l t u r e so fs w e

3、e t ' p o t a t oC V ．X u s h u1 8w e r e e s t a b l i s h e dt h r o u g ht h eu s eo ft h e t h r e e d i f f e r e n t s h o o t Ⅱp S ．T h e s o m a c l o n a l v a r i a t i o n i n t h e p r o c e s so f e m b

4、r y o g e n i c s u s p e n s i o nc u l t u r e s a n d p l a n tr e g e n e r a t i o n w a si n v e s t i g a t e ds y s t e m a t i c a l l y ．S h o o t t i p s o f a b o u t 0 ．5 m mi n l e n g t h g a v e r i s e t

5、 o e m b r y o g e n i cc a l l u s e s o n M Sm e d i u ms u p p l e m e n t e dw i t h 2 ．0 m g 。L ．1 2 , 4 - D ．T h eo b t a i n e de m b r y o g e n i c c a l l u s e s w e r eu s e d t o i n i t i a t e c e l ls u s

6、 p e n s i o nc u l t u r e s i nM S m e d i u mc o n t a i n i n g2 ．0 m g 。L ．12 , 4 - D ．R a p i d l y - g r o w i n ga n dw e l l - d i s p e r s e dc e l ls u s p e n s i o nc u l t u r e sw e r e e s t a b l i s h

7、e d ．S i x t e e nw e e k s ，t w e n t y w e e k s ，a n dt w e n t y - f o u rw e e k s a f t e r t h ei n i t i a t i o no fs u s p e n s i o n c u l t u r e sf r o mt h e t h r e ed i f f e r e n ts h o o tt i p s ，c e

8、 l l a g g r e g a t e sa b o u t 1 ．0 m m i nd i a m e t e r w e r et r a n s f e r r e d t o M Sa g a r m e d i u m s u p p l e m e n t e d 、v i t h 2 ．0 m g ’L ．‘2 , 4 - D a n d f o r m e de m b r y o g e n i cc a l l

9、 u s e s w i t h s o m a t i ce m b r y o s ．T h ee m b r y o g e n i cc a l l u s e s w i t h s o m a t i ce m b r y o sw e r ef u r t h e rt r a n s f e r r e dt oM S a g a rm e d i u m s u p p l e m e n t e dw i t h1

10、．0m g ’L - 1 A B A ，r e s u l t i n gi nt h eg e r m i n a t i o no fs o m a t i ce m b r y o s ．T h ef r e q u e n c i e so fp l a n tm g e n e r a l l o nr e a c h e d 1 0 0 ％i na l l t h r e es h o o tt i p s ．T h ec

11、a l l u s e sw i t hs o m a t i c e m b r y o sa n dp l a n t l e t sw e r e f u r t h e rt r a n s f e r r e dt o t h eb a s a lm e d i u m ，r e s u l t i n gi nt h er e g e n e r a t i o n o f2 8 9 ，5 4 0 ，a n d9 7 1 p

12、 l a n t sf r o m t h r o ed i f f e r e n t s h o o tt i p s ，r e s p e c t i v e l y ．F r o m t h e 1 8 0 0r e g e n e r a t e d p l a n t s o f X u s h u1 8 ，5 2 5 p l a n t s w e r es a m p l e dr a n d o m l y f o r

13、 t h ei s o e n z y m ea n a l y s i s ．T h er e s u l t ss h o w e dt h a to b v i o u s v a r i a t i o n s i np e r o x i d a s ei s o z y m ep a t t e r n sW e l ' ef o u n d i n I I o ft h e5 2 5 p l a n t s ( 2

14、 ．0 9 5 ％) ' o b v i o u s v a r i a t i o n so fe s t e r a s ei s o z y m e p a t t e r n se x i s t e di n 1 2o ft h e5 2 5p l a n t s ( 2 ．2 8 6 ％) ，a n di n t h e4p l a n t s ( 0 ．7 6 2 ％) o b v i o u sv a r i a

15、 t i o n so fb o t hi s o z y m ep a H e m sw e r eo b s e r v e di nc o m p a r i s o nw i t h t h ec o n t r 0 1 ．R A P Da n a l y s i s w a sc o n d u c t e df o rt h e 1 9 i s o e n z y m ev a r i a n t sa n d t h e9

16、 0p l a n t ss a m p l e dr a n d o m l y f r o m t h e1 8 0 0 r e g e n e r a t e dp l a n t s ．I tw a s i n d i c a t e dt h a t2 0o ft h e3 0R A P D p r i m e r s u s e dg e n e r a t e dd i f f e r e n t p r o f i l

17、e si n5 8 o ft h e9 0p l a n t s ( 6 4 ．4 4 4 ％、c o m p a r e d t ot h e c o n t r o l p l a n t s ；a n d a l l t h e 3 0R A P Dp r i m e r su s e dg e n e r a t e d d i f f e r e n tp r o f i l e si n 1 7o ft h e 1 9i s

18、 o z y m ev a r i a n t sc o m p a r e dt o t h ec o n t r o lp l a n t s ．T h er e g e n e r a t e dp l a n t sw e r et r a n s p l a n t e di n a f i e l d ．V a r i a t i o U S o f l e a f v e i n c o l o r a n dr o o

19、t s k i n c o l o rw e r eo b s e r v e d i n 0 ．5 0 0 ％a n d3 ．9 4 4 ％o ft h er e g e n e r a t e dp l a n t s ．r e s p e c t i v e l y ．A n a l y s i sf o rt h e d r y m a t t e rc o n t e n td e m o n s t r a t e dt h

20、 a tt h ed r ym a t t e rc o n t e n t w a sa l s oc h a n g e d i nap a r to ft h er e g e n e r a t e dp l a n t s ．K e y w o r d s ：S w c e t p o t a t o ，E m b r y o g e n i c s u s p e n s i o nc u l t u r e s ，S o