添加菊科植物黃花蒿提取物對(duì)奶山羊乳中CLA含量影響及機(jī)理研究.pdf

1、本論文通過正交試驗(yàn)，確定了黃花蒿提取物的最佳提取工藝條件，并采用GC-MS和LC-MS測(cè)定了其中的活性成分。在此基礎(chǔ)上，采用體外批次試驗(yàn)、飼養(yǎng)試驗(yàn)、乳腺動(dòng)靜脈血插管試驗(yàn)和乳腺組織體外培養(yǎng)試驗(yàn)，系統(tǒng)地研究了黃花蒿提取物對(duì)體外C18不飽和脂肪酸氫化率、體內(nèi)Vfa等瘤胃內(nèi)環(huán)境指標(biāo)、瘤胃、血液、乳中VA、CLA和脂肪酸的變化以及乳腺組織SCD酶等的影響，初步探討了黃花蒿提取物對(duì)乳中CLA的影響和作用機(jī)制。本研究共分為五部分：
　　 第一

2、部分黃花蒿活性成分的最佳提取工藝條件和其活性成分的研究本試驗(yàn)選用黃花蒿，采用正交試驗(yàn)，根據(jù)得率高低確定最佳提取工藝條件，并通過GC-MS和LC-MS測(cè)定了黃花蒿提取物的括性成分。結(jié)果表明：①黃花蒿提取物的最佳提取工藝條件是乙醇濃度為55％、提取溫度為95℃和提取時(shí)間為2h;②使用GC-MS和LC-MS測(cè)定的黃花蒿提取物的活性成分主要包括倍半萜類、芳香族類、脂肪酸類、甾體類、黃酮類、三萜類、脂肪族類、生物堿類、酚類、雜環(huán)類、萜類及其它化合

3、物類的物質(zhì)。
　　 第二部分黃花蒿提取物對(duì)瘤胃培養(yǎng)液內(nèi)VA、CLA、C18不飽和脂肪酸氫化率及其它脂肪酸組成影響的研究本試驗(yàn)通過體外批次試驗(yàn)，選用黃花蒿提取物的凍干粉作為添加劑，添加劑量分別是0、3、30、300和3000mg*L。結(jié)果表明：①隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，C18(C9c18：1、C18：2和C18：3)不飽和脂肪酸氫化率均逐漸上升，到24h達(dá)到最高值，此時(shí)亞油酸C18：2生物氫化率在68．33-82．71％之間，亞麻酸C

4、18：3氫化率在54.37-82．11％之間，但C18不飽和脂肪酸的組成逐漸被氫化而減少，到24h降到最低。②隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，氫化生成的VA逐漸增加，到24h達(dá)到最高值；CLA逐漸被氫化而減少，到24h降到最低，24h的VA／CLA在18.79-41.06之間，添加黃花蒿提取物增加了培養(yǎng)液中VA的含量。
　　 第三部分黃花蒿提取物對(duì)奶山羊瘤胃內(nèi)環(huán)境指標(biāo)和瘤胃、血液及乳中脂肪酸組成影響的研究本試驗(yàn)選擇9只體重約38kg的泌乳期

5、(泌乳天數(shù)120±15d)關(guān)中奶山羊，安裝永久性瘤胃瘺管。采用3×3拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)分為對(duì)照組和2個(gè)處理組(處理一組和處理二組，黃花蒿提取物的添加量分別為每只7．26g/d和12．10g/d)，分3期進(jìn)行；每期30天，前14天為適應(yīng)期，15～30天為采樣期。結(jié)果表明；①舔加黃花蒿提取物的兩個(gè)處理組有增加瘤胃液Ph值的趨勢(shì)；②兩個(gè)處理組有降低隅_N濃度的趨勢(shì);③兩個(gè)處理組有降低TVFA濃度、乙酸濃度、丙酸濃度和丁酸濃度的趨勢(shì)，有增加A

6、／P的趨勢(shì)；④添加黃花蒿提取物增加了瘤胃液、血液中VA含量，有降低C18不飽和脂肪酸含量的趨勢(shì)；⑤添加黃花蒿提取物增加了羊奶中VA和CLA含量，與對(duì)照組相比，處理二組顯著增加了VA和CLA的含量；⑥處理一組有增加采食量的趨勢(shì)，處理二組有降低采食量的趨勢(shì)；⑦兩個(gè)處理組有增加產(chǎn)奶量的趨勢(shì)，有增加乳成分的趨勢(shì)。
　　 第四部分添加黃花蒿提取物對(duì)奶山羊陰外動(dòng)脈和乳靜脈內(nèi)脂肪酸組成的變化及乳腺組織中與CLA合成相關(guān)酶的Mrna豐度影響的研

7、究本試驗(yàn)選擇9只體重在38±3．12 kg的泌乳期(泌乳天數(shù)210±15d)關(guān)中奶山羊。
　　 試驗(yàn)分為3組，分別為對(duì)照組和處理一和處理二組(同第三部分試驗(yàn))。預(yù)飼期30天，然后在陰外動(dòng)脈和乳靜脈安裝血插管進(jìn)行正式試驗(yàn)，正式試驗(yàn)期9天，最后2天連續(xù)采集乳腺陰外動(dòng)脈和乳靜脈的血用于脂肪酸的測(cè)定。結(jié)果表明：①添加黃花蒿提取物能增加動(dòng)靜脈血液中VA和CLA的含量；②乳腺組織合成中短鏈脂肪酸，但不能合成長(zhǎng)鏈脂肪酸；③添加黃花蒿提取物降低

8、了SOD酶豐度、ACC酶的豐度，增加了FAS酶的豐度，試驗(yàn)一組顯著增加了LPL酶豐度，試驗(yàn)二組顯著降低了LPL酶豐度。
　　 第五部分體外乳腺組織培養(yǎng)研究黃花蒿提取物對(duì)乳腺上皮細(xì)胞中CLA、VA等含量的影響。
　　 本試驗(yàn)體外乳腺組織培養(yǎng)中，乳腺組織來源于一頭健康的泌乳奶牛，黃花蒿提取物的添加劑量分別為0 mg／L、2.5 mg/L、5 mg/L和10 mg/L四個(gè)組。結(jié)果表明：①添加黃花蒿乙醇提取物抑制了乳腺上皮細(xì)胞的