添加菊科植物黃花蒿提取物對奶山羊乳中CLA含量影響及機理研究.pdf

1、本論文通過正交試驗，確定了黃花蒿提取物的最佳提取工藝條件，并采用GC-MS和LC-MS測定了其中的活性成分。在此基礎(chǔ)上，采用體外批次試驗、飼養(yǎng)試驗、乳腺動靜脈血插管試驗和乳腺組織體外培養(yǎng)試驗，系統(tǒng)地研究了黃花蒿提取物對體外C18不飽和脂肪酸氫化率、體內(nèi)Vfa等瘤胃內(nèi)環(huán)境指標、瘤胃、血液、乳中VA、CLA和脂肪酸的變化以及乳腺組織SCD酶等的影響，初步探討了黃花蒿提取物對乳中CLA的影響和作用機制。本研究共分為五部分：
　　 第一

2、部分黃花蒿活性成分的最佳提取工藝條件和其活性成分的研究本試驗選用黃花蒿，采用正交試驗，根據(jù)得率高低確定最佳提取工藝條件，并通過GC-MS和LC-MS測定了黃花蒿提取物的括性成分。結(jié)果表明：①黃花蒿提取物的最佳提取工藝條件是乙醇濃度為55％、提取溫度為95℃和提取時間為2h;②使用GC-MS和LC-MS測定的黃花蒿提取物的活性成分主要包括倍半萜類、芳香族類、脂肪酸類、甾體類、黃酮類、三萜類、脂肪族類、生物堿類、酚類、雜環(huán)類、萜類及其它化合

3、物類的物質(zhì)。
　　 第二部分黃花蒿提取物對瘤胃培養(yǎng)液內(nèi)VA、CLA、C18不飽和脂肪酸氫化率及其它脂肪酸組成影響的研究本試驗通過體外批次試驗，選用黃花蒿提取物的凍干粉作為添加劑，添加劑量分別是0、3、30、300和3000mg*L。結(jié)果表明：①隨著培養(yǎng)時間的延長，C18(C9c18：1、C18：2和C18：3)不飽和脂肪酸氫化率均逐漸上升，到24h達到最高值，此時亞油酸C18：2生物氫化率在68．33-82．71％之間，亞麻酸C

4、18：3氫化率在54.37-82．11％之間，但C18不飽和脂肪酸的組成逐漸被氫化而減少，到24h降到最低。②隨著培養(yǎng)時間的延長，氫化生成的VA逐漸增加，到24h達到最高值；CLA逐漸被氫化而減少，到24h降到最低，24h的VA／CLA在18.79-41.06之間，添加黃花蒿提取物增加了培養(yǎng)液中VA的含量。
　　 第三部分黃花蒿提取物對奶山羊瘤胃內(nèi)環(huán)境指標和瘤胃、血液及乳中脂肪酸組成影響的研究本試驗選擇9只體重約38kg的泌乳期

5、(泌乳天數(shù)120±15d)關(guān)中奶山羊，安裝永久性瘤胃瘺管。采用3×3拉丁方試驗設(shè)計，試驗分為對照組和2個處理組(處理一組和處理二組，黃花蒿提取物的添加量分別為每只7．26g/d和12．10g/d)，分3期進行；每期30天，前14天為適應(yīng)期，15～30天為采樣期。結(jié)果表明；①舔加黃花蒿提取物的兩個處理組有增加瘤胃液Ph值的趨勢；②兩個處理組有降低隅_N濃度的趨勢;③兩個處理組有降低TVFA濃度、乙酸濃度、丙酸濃度和丁酸濃度的趨勢，有增加A

6、／P的趨勢；④添加黃花蒿提取物增加了瘤胃液、血液中VA含量，有降低C18不飽和脂肪酸含量的趨勢；⑤添加黃花蒿提取物增加了羊奶中VA和CLA含量，與對照組相比，處理二組顯著增加了VA和CLA的含量；⑥處理一組有增加采食量的趨勢，處理二組有降低采食量的趨勢；⑦兩個處理組有增加產(chǎn)奶量的趨勢，有增加乳成分的趨勢。
　　 第四部分添加黃花蒿提取物對奶山羊陰外動脈和乳靜脈內(nèi)脂肪酸組成的變化及乳腺組織中與CLA合成相關(guān)酶的Mrna豐度影響的研

7、究本試驗選擇9只體重在38±3．12 kg的泌乳期(泌乳天數(shù)210±15d)關(guān)中奶山羊。
　　 試驗分為3組，分別為對照組和處理一和處理二組(同第三部分試驗)。預飼期30天，然后在陰外動脈和乳靜脈安裝血插管進行正式試驗，正式試驗期9天，最后2天連續(xù)采集乳腺陰外動脈和乳靜脈的血用于脂肪酸的測定。結(jié)果表明：①添加黃花蒿提取物能增加動靜脈血液中VA和CLA的含量；②乳腺組織合成中短鏈脂肪酸，但不能合成長鏈脂肪酸；③添加黃花蒿提取物降低

8、了SOD酶豐度、ACC酶的豐度，增加了FAS酶的豐度，試驗一組顯著增加了LPL酶豐度，試驗二組顯著降低了LPL酶豐度。
　　 第五部分體外乳腺組織培養(yǎng)研究黃花蒿提取物對乳腺上皮細胞中CLA、VA等含量的影響。
　　 本試驗體外乳腺組織培養(yǎng)中，乳腺組織來源于一頭健康的泌乳奶牛，黃花蒿提取物的添加劑量分別為0 mg／L、2.5 mg/L、5 mg/L和10 mg/L四個組。結(jié)果表明：①添加黃花蒿乙醇提取物抑制了乳腺上皮細胞的