ABA和H2O2對干旱高溫復(fù)合脅迫透導(dǎo)的玉米sHSPs和抗氧化防護(hù)酶的作用.pdf

1、為確定脫落酸(ABA)和H2O2在干旱高溫復(fù)合脅迫誘導(dǎo)的玉米(Zea mays L.)葉片和根系小熱休克蛋白(sHSPs)和抗氧化防護(hù)中的作用,本研究以玉米鄭單958及ABA缺失突變體vp5為實(shí)驗(yàn)材料,首先通過引物設(shè)計和。RT-PCR分析篩選出干旱高溫復(fù)合脅迫誘導(dǎo)產(chǎn)生的sHSPs基因,其次采用ABA抑制劑鎢酸鈉(T)和H2O2清除劑KI(Ⅰ),通過RT-PCR分析ABA和H2O2對玉米葉片和根中sHSPs和抗氧化防護(hù)酶基因表達(dá)的影響,最

2、后通過Westernblot分析驗(yàn)證了sHSP26的表達(dá)。具體研究結(jié)果如下:
　　 1.從NCBI數(shù)據(jù)庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)GenBank中查找出玉米sHSPs已發(fā)表的全部基因序列,利用軟件Dnaman對不同家族的sHSPs基因序列分別進(jìn)行比對分析,并利用軟件Oligo6.0分別在其保守區(qū)設(shè)計引物,最后通過RT-PCR篩選出誘導(dǎo)型sHSPs基因,本實(shí)驗(yàn)篩選出的誘導(dǎo)型sHSPs基因分別有:s

3、HSP16.9、sHSP17.2、sHSP17.4、sHSP17.5、sHSP22和sHSP26。另外還分別對四種抗氧化防護(hù)酶的基因設(shè)計了引物:過氧化氫酶1(catalase1,CAT1)、抗壞血酸過氧化物酶(cytolic ascorbate peroxidase,cAPX)、谷胱甘肽還原酶1(glutathione reductase1,GR1)和超氧化物歧化酶4(superoxide dismutase4,SOD4)。
　　

4、 2.ABA抑制劑鎢酸鈉和H2O2清除劑KI預(yù)處理結(jié)果表明:(1)六種sHSPs基因在玉米葉片中的表達(dá)分別都受到T不同程度的抑制,而根中只有sHSP16.9、sHSP17.2、sHSP17.5和sHSP22表達(dá)稍微受到抑制,CAT1、cAPX、GR1和SOD4四種抗氧化防護(hù)酶基因表達(dá)在玉米葉片和根中均受到T明顯抑制。(2)與未用100μM ABA預(yù)處理的vp5相比,100ⅡM ABA預(yù)處理明顯增強(qiáng)了四種抗氧化防護(hù)酶基因在突變體vp5葉

5、片和根中的表達(dá),但是僅稍微提高了六種sHSPs基因在葉片中的表達(dá)和sHSP17.2在根中的表達(dá)。(3)KI預(yù)處理明顯抑制了四種酶基因在玉米葉片和根中的表達(dá),但是稍微抑制了六種sHSPs基因在玉米葉片中的表達(dá)和sHSP16.9、sHSP172、sHSP17.5、sHSP22和sHSP26五種基因在根中的表達(dá)。
　　 3.Western blot實(shí)驗(yàn)檢測分析sHSP26的表達(dá),結(jié)果顯示,在玉米葉片中T和I均明顯抑制了sHSP26的表