水曲柳體胚發(fā)生技術優(yōu)化及H2O2和NO作用分析.pdf

1、水曲柳(F.mandshurica Rupr.)屬木犀科白蠟樹屬，是東北3大硬闊葉樹種之一。本文以水曲柳成熟合子胚為外植體，通過研究外源H2O2和NO對水曲柳體胚發(fā)生的影響及對細胞內總死亡量、細胞內H2O2含量和細胞內NO含量的影響，分析其在水曲柳體胚發(fā)生和外植體細胞死亡中的作用，探究其在信號網絡中的位置;同時篩選進行水曲柳體胚增殖和萌發(fā)培養(yǎng)的材料，然后以胚性愈傷組織為繼代材料研究成功誘導體胚以后繼代次數對體胚增殖和植株再生的影響，分析

2、水曲柳體胚繼代過程中的胚性保持能力和植株再生能力，為進行水曲柳種質資源保存提供保障。主要研究結果如下：
　　1.H2O2和NO在水曲柳體胚發(fā)生中均起著重要的作用。適當增加外植體細胞內H2O2含量促進體胚發(fā)生;清除外植體細胞中H2O2不利于體胚發(fā)生和后期發(fā)育。增加外植體細胞內NO含量有利于體胚發(fā)生和發(fā)育，提高體胚質量;減少外植體細胞中NO含量不利于水曲柳體胚發(fā)生和發(fā)育，降低體胚質量。
　　2.水曲柳體胚增殖培養(yǎng)過程中，4 mm

3、未變綠體胚的直接增殖效果最好。相比直接增殖材料，進行繼代增殖培養(yǎng)的最佳材料為愈傷組織。水曲柳體胚增殖系數隨增殖繼代次數的增加而增加。
　　3.水曲柳體胚萌發(fā)培養(yǎng)過程中，4～8mm未變綠體胚的萌發(fā)效果最佳。隨著增殖繼代次數的增加，水曲柳次生體胚的體胚萌發(fā)率逐漸降低;隨著萌發(fā)培養(yǎng)時間的延長，體胚均出現(xiàn)大量的褐化死亡現(xiàn)象。隨著增殖繼代次數的增加，水曲柳次生體胚的體胚生根率呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。
　　4.H2O2和NO作為信號因子

4、共同參與了高濃度蔗糖脅迫誘導的水曲柳體胚發(fā)生過程中的外植體細胞死亡過程，NO在信號網絡中作為H2O2的上游信號。H2O2處理抑制細胞總死亡量，促進細胞內H2O2含量的生成，促進細胞內NO含量的生成;CAT處理抑制細胞總死亡量，抑制細胞內H2O2含量的生成，抑制細胞內NO的生成。
　　5.SNP處理抑制水曲柳外植體細胞死亡，抑制細胞內H2O2的產生，促進細胞內NO的產生;PTIO抑制細胞死亡，抑制細胞內H2O2的產生，抑制細胞內NO