黑龍江省兒童和伴侶動(dòng)物三種重要腸道原蟲(chóng)的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、由寄生蟲(chóng)引起的疾病是全球感染性疾病的一個(gè)重要組成部分。一般在發(fā)達(dá)國(guó)家會(huì)引起人和動(dòng)物相應(yīng)的疾病，然而在發(fā)展中國(guó)家則主要引起感染甚至死亡。2004年，世界衛(wèi)生組織報(bào)道由腹瀉引起的疾病比其他一些疾病更困擾人們。許多種腸道寄生性原蟲(chóng)能引起人和動(dòng)物的腹瀉，甚至引發(fā)更嚴(yán)重的疾病，尤其是在免疫功能缺陷的群體中。隱孢子蟲(chóng)、畢氏腸微孢子蟲(chóng)、藍(lán)氏賈第蟲(chóng)是三種重要的引起人和動(dòng)物腹瀉的病原，一般在免疫功能正常的群體中主要引起自限性腹瀉，而在免疫功能不全（HIV

2、陽(yáng)性患者）或者是免疫力低下的群體（如幼齡和老齡的人和動(dòng)物）中會(huì)引起致死性腹瀉。因此得到較為廣泛的關(guān)注。
　　本實(shí)驗(yàn)采用巢式PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）方法對(duì)來(lái)自黑龍江省哈爾濱市、大慶市的255份兒童糞便樣本及哈爾濱市、大慶市和齊齊哈爾市的319份伴侶動(dòng)物糞便樣本（其中犬的糞便樣本267份、貓的糞便樣本52份）分別進(jìn)行隱孢子蟲(chóng)、畢氏腸微孢子蟲(chóng)和藍(lán)氏賈第蟲(chóng)基因擴(kuò)增。通過(guò)SSU RNA（小亞基核糖體RNA）擴(kuò)增來(lái)對(duì)隱孢子蟲(chóng)蟲(chóng)種進(jìn)行鑒定，結(jié)果

3、顯示，本研究中貓和犬體內(nèi)隱孢子蟲(chóng)的平均感染率分別為3.8％(2/52)和2.2％(6/267)。在貓的糞便樣本中鑒定出兩種隱孢子蟲(chóng):貓隱孢子蟲(chóng)(C.felis(n=1))和微小隱孢子蟲(chóng)(C.parvum(n=1))，其中貓隱孢子蟲(chóng)和微小隱孢子蟲(chóng)感染率均為1.9％(1/52)，在犬的糞便樣本中鑒定出兩種隱孢子蟲(chóng)，分別為犬隱孢子蟲(chóng)(C.canis(n=5))和泛在隱孢子蟲(chóng)(C.ubiquitum(n=1))，其中犬隱孢子蟲(chóng)和泛在隱孢子蟲(chóng)的感

4、染率分別為1.9％(5/267)和0.4％(1/267)。然而在被研究的兒童糞便樣本中未發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲(chóng)陽(yáng)性樣本。對(duì)畢氏腸微孢子蟲(chóng)的檢測(cè)和分型則采用巢式PCR擴(kuò)增ITS（轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)），結(jié)果發(fā)現(xiàn)兒童總體感染率為7.5％(19/255)，其中哈爾濱市兒童感染率為11.9％(16/134)，大慶市兒童感染率為2.5％(3/121)。男性感染率為6.5％(8/124)，而女性感染率為8.4％(11/131)。4個(gè)腹瀉樣本感染率為25％(1/4)，而

5、非腹瀉樣本感染率為7.2％(18/251)。由此可見(jiàn)，畢氏腸微孢子蟲(chóng)是引起腹瀉的重要原因。隨后對(duì)陽(yáng)性樣本進(jìn)行測(cè)序分型共獲得8種基因型包括3種已知的基因型CS-4(n=2)、EbpC(n=11)和Henan-Ⅳ(n=3)及5種新發(fā)現(xiàn)的基因型NEC1(n=1)、NEC2(n=1)、NEC3(n=1)、NEC4(n=1)和NEC5(n=1)，其中Henan-Ⅳ和NEC1、EbpC和NEC4分別在哈爾濱醫(yī)院和小學(xué)樣本中呈現(xiàn)混合感染。同時(shí)本研究結(jié)

6、果顯示在伴侶動(dòng)物樣本中，共發(fā)現(xiàn)畢氏腸微孢子蟲(chóng)陽(yáng)性樣本21個(gè)其中包括18個(gè)犬和3個(gè)貓，而在這些動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)8種基因型，4種已知基因型D、EbpC、Ⅳ和PtEbⅨ，4種新發(fā)現(xiàn)的基因型分別命名為NED1至NED4。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示，在18個(gè)犬的樣本中發(fā)現(xiàn)有人畜共患潛力的基因型D(n=1)、EbpC(n=2)、NED1(n=1)和NED2(n=1)及宿主特異性的基因型NED3(n=1)、NED4(n=1)和PtEbⅨ(n=14)，其中基因型Eb

7、pC和NED1、PtEbⅨ和NED3混合感染見(jiàn)于哈爾濱動(dòng)物醫(yī)院的樣本中，而PtEbⅨ和NED4的混合感染出現(xiàn)在哈爾濱寵物市場(chǎng)樣本中。在3個(gè)貓的樣本中發(fā)現(xiàn)能造成人畢氏腸微孢子蟲(chóng)病的基因型D(n=2)和Ⅳ(n=1)。在伴侶動(dòng)物和人的糞便樣本中均發(fā)現(xiàn)的基因型為EbpC。
　　本實(shí)驗(yàn)利用巢式PCR方法對(duì)兒童和伴侶動(dòng)物的樣本進(jìn)行賈第蟲(chóng)TPI（磷酸丙糖異構(gòu)酶）基因的檢測(cè)。在所有的兒童樣本中均沒(méi)有發(fā)現(xiàn)賈第蟲(chóng)陽(yáng)性，在貓和犬的糞便樣本樣本中發(fā)現(xiàn)賈第

8、蟲(chóng)感染率分別為1.9％(1/52)和4.5％(12/267)，共鑒定出3種集聚體類(lèi)型(F、C和E)。其中集聚體F見(jiàn)于一個(gè)貓中而集聚體C(n=7)和E(n=5)被發(fā)現(xiàn)在12個(gè)犬中。
　　本實(shí)驗(yàn)在伴侶動(dòng)物中鑒定出的隱孢子蟲(chóng)蟲(chóng)種C.canis、C.felis和C.parvum，畢氏腸微孢子蟲(chóng)基因型D、EbpC和Ⅳ以及賈第蟲(chóng)集聚體C在我國(guó)人體內(nèi)都有感染的報(bào)道。在伴侶動(dòng)物犬貓中發(fā)現(xiàn)的隱孢子蟲(chóng)蟲(chóng)種C.canis、C.parvum和C.ubiq