黑龍江肇東自然人群乙肝病毒分子流行病學初步分析.pdf

1、目的：了解黑龍江省肇東市自然人群中乙型肝炎病毒(HBV)基因型、血清亞型分布情況及基因型與血清亞型的關系；了解自然人群中HBV S基因的核苷酸水平變異及氨基酸水平變異情況；分析HBV基因型與臨床轉歸之間的關系。 方法：2005年，以黑龍江省肇東市雙勝村和先鋒村兩個農村為研究現場，以全屯居民為研究對象，對全屯居民進行了一次橫斷面血清流行病學調查，采用固相放射免疫(SPRIA)法檢測HBsAg、抗-HBs和抗-HBc三項乙肝病毒感染

2、指標，采用酶聯免疫(ELISA)法檢測HBeAg和抗-HBe兩項感染指標。結合1986年這兩個現場的血清流行病學調查資料，綜合ALT、B超和臨床體檢等結果，按照2005年12月10日制定的《慢性乙型肝炎防治指南》的診斷標準，選擇可作出明確臨床診斷的110例作為研究對象。其中無癥狀HBV攜帶者(ASC)86例，慢性乙型肝炎(CH)12例，肝硬化(LC)5例，肝細胞肝癌(HCC)1例，恢復6例。男性60例，女性50例。平均年齡36歲。對從1

3、10例研究對象中抽取的血清標本采用巢式PCR法擴增HBV DNA。利用QIAamp DNA BloodMini Kit，按照試劑盒操作說明書要求從200 μl血清中提取HBV DNA，將其作為模板，設計合成2對引物擴增HBV S基因。擴增產物經1％瓊脂糖凝膠電泳鑒定后，應用Wizard SVGel and PCR Clean-Up System試劑盒進行純化回收。將回收后的產物送生物公司利用ABI 3773自動熒光測序儀測序。利用DNA

4、STAR軟件對測序標本的核苷酸序列與從GenBank中獲取的HBv A-H各基因型標準序列進行比對分析，繪制基因進化樹，確定基因型。由核苷酸序列推導氨基酸序列，確定血清亞型。應用SAS8.1軟件對實驗結果進行Fisher確切概率法的統(tǒng)計學處理分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。 結果：110例血清標本中，97例HBV DNA陽性，陽性率為88.2％。97例標本的基因型分布為：B基因型9例，占9.3％；C型87例，占89.7％；D

5、型1例，占1.0％。血清亞型分布為：adr亞型77例，占79.4.％；adw2亞型11例，占11.3％；ayr亞型8例，占8.2％：ayw2亞型1例，占1.0％。9例B基因型標本的血清亞型均為adw2亞型；87例C基因型標本的血清亞型為：adrq<'+> 75例 (占86.2％)，adrq<'-> 2例 (占2.3％)，adw2 2例(占2.3％)；avr 8例(占9.2％)；1例D基因型標本的血清亞型為avw2亞型。用Fisher確切

6、概率法對不同基因型的血清亞型構成進行統(tǒng)計分析，P值為0.0000，有統(tǒng)計學意義。 9例B基因型感染者中，4例(44.4％)為ASC，5例為CH(55.6％)；87例C基因型感染者中，3例為恢復者(3.4％)，73例為ASC (83.9％)，7例為CH (8.1％)，3例為LC (3.4％)和1例為HCC (1.2％)；1例D基因型感染者為ASC (100％)。Fisher確切概率法對不同基因型的臨床轉歸進行統(tǒng)計分析，P值為0.0

7、288，有統(tǒng)計學意義。 本次試驗共獲得84例HBV S基因540nt完整序列結果。通過對這些核苷酸序列的堿基替換位點以及由核苷酸序列推導出的氨基酸序列的突變位點分析，發(fā)現131個位點有堿基替換現象，其中40個位點為同義突變， 89個位點為錯義突變，2個位點為無義突變。主要結構同源區(qū)(MHR，aa100-160)發(fā)現45個位點有堿基替換現象，其中18個位點為同義突變，27個位點為錯義突變。錯義突變中有2個位點產生了有意義的氨基酸突

8、變—Q129H (1例)和M133L(1例)，位于抗原決定簇a的第一個莖環(huán)結構內。1例在aa119～120間有三個氨基酸TTE的插入。HBV S基因每100個核苷酸替換的頻數為2.19。 結論： 1 黑龍江肇東市HBV基因型分布以C基因型為主，存在少量的B型和D型。 2 黑龍江肇東市HBV血清亞型分布以adr亞型為主(adrq<'+> 和adrq<'-> 均有，但以adrq<'+>為主)，存在少量的adw2、ay

9、r和ayw2亞型。 3 HBV不同基因型的血清亞型的構成不同。B基因型標本的血清亞型均為adw2；C型標本的血清亞型主要為adr，有少量的adw2和ayr；D型標本的血清亞型為avw2。提示HBV基因型與血清亞型存在一定的相關性。 4 HBV不同基因型的臨床轉歸不同。B基因型感染者中ASC和CH均有，CH與ASC者相比稍多。C基因型感染者中以ASC為主，CH次之，其次為恢復、LC和HCC。提示B基因型感染者較易形成CH，