UNG2多態(tài)性與乙肝病毒及其變異在乙肝相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、在全世界人口中，有大約30％的人群感染過乙肝病毒，在這類人群中約有3.5億人是乙肝病毒攜帶者，而其中大約80％的肝癌是由HBV感染引起的。雖然在絕大多數(shù)國家，由于乙肝疫苗的普及，急性HBV感染率在逐漸降低，但HBV慢性感染相關(guān)的癌癥和死亡率卻在逐年上升。我國肝癌的發(fā)生率和死亡率都排名前十，肝癌的預(yù)防和診治已成為我國亟需解決的重大公共衛(wèi)生問題。HCC發(fā)生的主要危險因素包括遺傳因素、HBV或HCV慢性感染，肝硬化，黃曲霉毒素的暴露，過度飲酒

2、和糖尿病等。
　　尿嘧啶-DNA-糖基化酶(UNG)是人體中非常重要的DNA切除修復(fù)酶，是核酸堿基切除修復(fù)通路中的關(guān)鍵分子，可以識別APOBECs誘導(dǎo)的C＞U突變，并切除尿嘧啶形成無堿基位點(AP site)，從而引發(fā)核酸鏈水解以進(jìn)行錯配修復(fù)。UNG酶分核內(nèi)型(UNG2)和線粒體型(UNG1)。其中UNG2的活性更高，且對乙肝病毒ssDNA作用也更強(qiáng)。因此，研究UNG2啟動子區(qū)的基因多態(tài)性和乙肝病毒變異在乙肝相關(guān)肝病發(fā)生發(fā)展中的作

3、用，對探索我國人群發(fā)生HCC的相關(guān)遺傳易感因素具有重要意義。
　　目的:
　　探索并分析UNG2 SNP rs3890995多態(tài)性與HBV病毒清除、乙肝病毒慢性感染所致的慢乙肝、肝硬化以及肝癌發(fā)生的風(fēng)險，以及此位點單核苷酸多態(tài)性與HBV的B亞型和C亞型突變的關(guān)系，進(jìn)而分別分析rs3890995多態(tài)性在肝硬化和肝癌的發(fā)生發(fā)展中與B、C亞型乙肝病毒變異的交互作用，以探討我國肝細(xì)胞癌易感人群的遺傳因素和相關(guān)病毒突變因素間的關(guān)系，以

4、UNG2的單核苷酸多態(tài)性以及相關(guān)病毒突變?yōu)橐罁?jù)，為預(yù)測HCC的發(fā)生發(fā)展提供大規(guī)模人群水平的流行病學(xué)線索。
　　方法:
　　本研究共囊括了健康對照1342例、乙肝病毒自然清除者302例，無癥狀HBsAg攜帶者316例、慢性乙肝患者866例、肝硬化患者482例以及肝細(xì)胞癌患者1165例。采用MGB-Taqman熒光探針實時定量PCR法對以上患者的DNA樣本進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性的檢測;巢式PCR法擴(kuò)增病毒后通過測序比對鑒定以上人群中

5、HBV感染者對所感染的HBV病毒基因亞型。登錄網(wǎng)站http://ihg.gsf.de/ihg/snps.html對該位點進(jìn)行Hardy-weinberg平衡檢驗。所得數(shù)據(jù)結(jié)果經(jīng)整理錄入后使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行進(jìn)一步分析，統(tǒng)計方法包括獨立樣本t檢驗或方差分析、x2檢驗和非條件Logistc回歸模型，以分析SNP多態(tài)性與乙肝各階段疾病、病毒變異及其相乘交互作用的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果:
　　1、UNG2 rs3890995多

6、態(tài)性與HBV感染以及乙肝各階段相關(guān)肝病的相關(guān)性
　　以健康人群為對照，與TT基因型相比，TC基因型臨界性地增加了肝癌發(fā)生的風(fēng)險（AOR=1.206，95％CI=1.000-1.454;P=0.05）。顯性模型(TC+CC)可增加肝癌的風(fēng)險(AOR=1.226，95％CI=1.027-1.464，P=0.024)。與非肝硬化人群相比， TC基因型顯著升高了HBV感染肝硬化發(fā)生的危險性，其顯性模型(TC+CC)也可增加肝癌發(fā)生的風(fēng)險(

7、AOR=1.393，95％ CI=1.110-1.747，P=0.004)。而TC、CC基因型在非肝癌的HBV感染組和肝癌組這兩組之間分布的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。以乙肝病毒自然清除者為對照組，攜帶TC基因型的人群比TT基因型更不容易發(fā)生非肝硬化的乙肝病毒的慢性感染(AOR=0.460，95％CI=0.297-0.712，P＜0.001)，其發(fā)生非肝癌的HBV感染的風(fēng)險性也變低(AOR=0.706，95％CI=0.527-0.946，P=0

8、.020)。rs3890995顯性模型(CT+CC)相對于TT型來說更容易發(fā)生乙肝病毒的清除(AOR=0.563，95％CI=0.375-0.847, P=0.006)。
　　以性別作為分層因素:在女性人群中，與健康對照組相比，rs3890995的各個基因型均與肝癌發(fā)生風(fēng)險并無統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)。而對于男性人群而言，攜帶CC基因型的人群比攜帶TT基因型的人群發(fā)生肝癌的風(fēng)險性明顯更大(AOR=1.469，95％CI=1.074-2.009，

9、P=0.016)，顯性模型(CT+CC)可增加男性人群患HCC的危險性(AOR=1.244，95％CI=1.021-1.515，P=0.030)。以HBV自然清除者作為對照，攜帶TC基因型的女性人群罹患早期肝病的風(fēng)險性明顯降低(AOR=0.548，95％CI=0.349-0.859，P=0.009)，對于顯性模型分析的結(jié)果也是如此(AOR=0.595，95％CI=0.389-0.911，P=0.017)。而男性人群中UNG2 rs389

10、0995多態(tài)性與HBV感染發(fā)生的早期肝病并無明顯關(guān)聯(lián)。以非肝硬化HBV感染組為對照，攜帶TC基因型的女性人群比攜帶TT基因型的女性人群發(fā)生肝硬化的風(fēng)險顯著地升高(AOR=2.334，95％CI=1.494-3.646，P＜0.001)，顯性模型(CT+CC)也顯著增高了發(fā)生肝硬化的風(fēng)險(AOR=1.900，95％CI=1.234-2.927，P=0.004)。在男性人群中，攜帶TC基因型的人群較容易發(fā)生肝硬化(AOR=1.332，95％

11、CI=1.003-1.770，P=0.048)。
　　以不同HBV亞型作為分層因素:在基因型為B型的乙肝病毒感染患者中與該位點的多態(tài)性和HCC的發(fā)病風(fēng)險并無關(guān)聯(lián)。但對于感染了C基因型HBV病毒的患者而言，TC基因型更顯著性地增加非肝癌乙肝患病人群發(fā)生肝癌的風(fēng)險(AOR=1.366，95％CI=1.068-1.748，P=0.013)，rs3890995 CC基因型雖然在C型感染者中與肝癌的發(fā)病風(fēng)險無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性，但顯性模型(TC+

12、CC)卻可增加慢性乙肝患者發(fā)展為肝癌的風(fēng)險(AOR=1.340，95％CI=1.063-1.690，P=0.013)。以非肝硬化HBV感染組作為對照，在感染C基因亞型乙肝病毒的人群中，攜帶TC基因型能顯著性地增加肝硬化的風(fēng)險(AOR=1.435，95％CI=1.002-2.005，P=0.049)。而CC基因型和顯性模型(CT+CC)在非肝硬化乙肝感染者和肝硬化組間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、UNG2 rs3890995多態(tài)性與

13、HBV突變的關(guān)系
　　rs3890995的TC基因型對于B型感染者體內(nèi)的病毒突變頻率影響較大，對于C型感染者體內(nèi)的病毒突變頻率影響較小。而rs3890995 CC基因型卻可以顯著影響C型感染者體內(nèi)的病毒突變頻率。對于B型感染者，調(diào)整年齡和性別后，UNG2 rs3890995的TC基因型在顯著增加G1899A、T2931C、T3026C、T109A、G2962A、T109A和G3063C的突變頻率;CC基因型可顯著性增加A1846T

14、的突變頻率，顯性模型(TC+CC)可增加G1899A突變頻率。
　　在C型感染者中，TC基因型可增加preSdeletion的突變頻率，降低T52C的突變頻率;CC基因型可增加A1652G、C1673T、A1727T、C1730G、C1799G的突變頻率，同時降低G1899A的突變頻率;顯性模型(CT+CC)可降低G1899A和T52C的突變頻率。
　　結(jié)論:
　　1、rs3890995 TC基因型及顯性模型(TC+C

15、C)可升高肝硬化和HCC發(fā)生的風(fēng)險。
　　2、以性別因素進(jìn)行分層后，在男性人群中，攜帶rs3890995 CC基因型和顯性模型(TC+CC)可增加肝癌發(fā)生風(fēng)險，而TC和顯性模型(TC+CC)則可增加女性人群非肝硬化HBV感染者發(fā)生肝硬化的風(fēng)險。
　　3、rs3890995 TC基因型可升高C型非HCC HBV感染者發(fā)生肝硬化和罹患肝癌的風(fēng)險，顯性模型(TC+CC)可增加肝癌發(fā)生風(fēng)險。
　　4、rs3890995的TC基

16、因型對于B型感染者體內(nèi)的病毒突變頻率影響較大，而CC基因型則可以顯著影響C型感染者體內(nèi)的病毒突變頻率。
　　5、在感染C型HBV的患者中，rs3890995 TC基因型與A1652G突變、顯性模型(TC+CC)與preSdeletion突變在肝癌的發(fā)生中存在著相乘交互作用;TC基因型與T1674G突變和C1730G突變在肝硬化的發(fā)生中也存在著相乘交互作用。
　　6、APOBEC3B rs2267401GG基因型與UNG2 r