喜樹CMCs和DDCs體系對香豆素類成分的生物轉(zhuǎn)化.pdf

1、喜樹(Camptotheca acuminate Decne.)是藍(lán)果樹科(Nyssaceae)喜樹屬(Camptotheca)植物。本實(shí)驗(yàn)室以喜樹的幼莖和嫩葉作為外植體分別誘導(dǎo)出形成層分生組織(Cambial meristematic cells，CMCs)和愈傷組織(Dedifferentiated plant cells。DDCs)。DDCs是經(jīng)細(xì)胞脫分化所形成的細(xì)胞系，而CMCs則是具有持續(xù)性分裂能力的未脫分化的細(xì)胞系。本文考察

2、了喜樹CMCs懸浮培養(yǎng)體系和DDCs懸浮培養(yǎng)體系的顯微鏡特性差異、對γ射線及類輻射藥物的敏感度差異，進(jìn)一步確定了誘導(dǎo)所得喜樹CMCs具有植物干細(xì)胞的特性。
　　喜樹堿(Camptothecin。CPT)和10-羥基喜樹堿(10-Hydroxycamptothecin,10-OH-CPT)是喜樹中的有效成分，它們的合成途徑涉及到很多酶和基因。本文對喜樹CMCs和DDCs中4個(gè)關(guān)鍵酶：色氨酸脫羧酶(tryptophan decarbo

3、xylase。TDC)、異胡豆苷合成酶(strictosidine synthase。STR)、色氨酸合成酶(tryptophan synthetase。TSB)、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylgutaryl-coenzyme A reductase。HMGR)的相關(guān)基因tdc1、tdc2、str、tsb、hmg2、hmg3的表達(dá)量進(jìn)行了對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)喜樹CMCs2中tdc2、str基因的表達(dá)

4、量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于CMCs1和 DDCs中的表達(dá)量。
　　香豆素是存在于自然界中具有抗腫瘤、抗真菌以及抗凝血作用的一類化合物。然而，香豆素類衍生物水溶性低且毒性大，限制了其臨床應(yīng)用。本文以Pechmann法合成4個(gè)甲基取代的香豆素：4,8-二甲基-7-羥基香豆素(I)、4,7-二甲基-6-羥基香豆素(II)、4-甲基-6,7-二羥基香豆素(III)和4,7-二甲基-5-羥基香豆素(IV)，并首次利用喜樹DDCs體系和CMCs體系對這4個(gè)香

5、豆素進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，以期得到其高效低毒的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)分離純化得到4個(gè)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，分別為4,8-二甲基香豆素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ia)、4,7-二甲基香豆素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(IIa)、4-甲基-6-羥基-7-甲氧基香豆素(IIIa)和4,7-二甲基香豆素-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(IVa)，其中Ia、IIa和IVa為新化合物。本文還考察了4個(gè)底物的最佳投底量、最佳共培養(yǎng)時(shí)間；檢測了底物和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的單胺氧化