布地奈德通過MicroRNA調(diào)控9HTEo-細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究布地奈德(Budesonide，BUD)對人氣道上皮9HTEO-細(xì)胞增殖的影響及其相關(guān)miRNA抑制9HTEO-細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。
　　方法：CCK-8法檢測布地奈德對9HTEO-細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測BUD對9HTEO-細(xì)胞周期分布的影響；瑞氏染色法觀察BUD處理9HTEO-細(xì)胞后形態(tài)變化；Hoechst33258染色觀察BUD處理9HTEO-細(xì)胞核的變化；透射電鏡觀察BUD處理9HTEO-細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化

2、；Real-time PCR法篩選BUD相關(guān)miRNA(let-7a、miR-451、miR-34a)；CCK-8法檢測miR-34a對9HTEO-細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測miR-34a對9HTEO-細(xì)胞周期分別的影響；生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-34a靶基因；Real-time PCR檢測miR-34a對9HTEO-細(xì)胞中CDC25A mRNA表達(dá)的影響；Western blot檢測miR-34a對9HTEO-細(xì)胞中CDC25A蛋

3、白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：3-10μM布地奈德對9HEO-細(xì)胞增殖具有抑制作用(P<0.01)；流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示G0/G1期細(xì)胞隨著布地奈德濃度的增加而增多，S期細(xì)胞逐漸減少；瑞氏染色觀察到3～10μM BUD作用后細(xì)胞呈梭狀、細(xì)胞密度減少、核染色質(zhì)變深等增殖受抑表現(xiàn)；熒光顯微鏡下，3～10μMBUD作用后細(xì)胞可見增殖受抑、凋亡形態(tài)；透射電鏡下，3～10μMBUD作用后部分細(xì)胞出現(xiàn)胞膜不完整、核膜欠清楚、細(xì)胞器變少、電子密度變淺

4、等改變：3-10μM BUD處理9HTEO-細(xì)胞后miR-34a的表達(dá)量明顯上調(diào)(p<0.01)；miR-34a mimics轉(zhuǎn)染組對9HTEO-細(xì)胞有明顯抑制作用(p<0.01)，G0/G1細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少(p<0.01)；生物信息學(xué)方法提示CDC25A為miR-34a靶基因之一，轉(zhuǎn)染miR-34a mimics可使CDC25A mRNA表達(dá)下調(diào)(p<0.05)，CDC25A蛋白表達(dá)明顯降低(p<0.01)。
　　結(jié)論：B