珍珠粉美白組分的提取工藝優(yōu)化和功效研究.pdf

1、珍珠(Pearl)在中醫(yī)學(xué)上被認(rèn)為歸心、肝經(jīng)，具有潤膚生肌和延緩皮膚衰老的作用?，F(xiàn)代研究表明珍珠粉蛋白具有美白功效，而目前對珍珠粉的提取一般為常規(guī)固液提取、酸水解和酶水解，但前者效率低，后兩者則破壞了珍珠粉中蛋白原有的存在形式和天然性，且目前珍珠粉美白成分的提取方法和提取物活性之間的關(guān)系尚無詳細(xì)報道，因此高效安全的提取方法和獲得高活性提取物是實(shí)現(xiàn)珍珠粉高效利用的關(guān)鍵。
　　本研究的主要內(nèi)容有:
　　(1)研究考察了珍珠粉總蛋

2、白的超聲輔助提取法，在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)法，優(yōu)化得到了珍珠粉總蛋白的最佳提取工藝條件:料液比0.350∶10g/mL，超聲功率200W，提取時間70.6min,總蛋白得率達(dá)0.126±0.002mg/g（蛋白/珍珠粉）。
　　(2)研究考察了珍珠粉中總蛋白的微波輔助提取法，在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)法，優(yōu)化得到了珍珠粉總蛋白的最佳提取工藝條件:料液比0.280∶10g/mL，提取溫度21℃，提取時間84s，總蛋白

3、提取率達(dá)0.117±0.002mg/g（蛋白/珍珠粉）。
　　(3)研究考察了不同提取方式所得到的珍珠粉提取物的總蛋白含量和分子量分布，結(jié)果顯示常規(guī)固液、超聲、微波、乳酸水解和酶水解提取物的總蛋白含量分別為0.051、0.126、0.119、0.021、0.551mg/g。前三種提取物中存在分子量大于130kDa和小于等于14kDa的蛋白分子，而酸水解提取物中只有分子量為5kDa-50kDa的蛋白分子，酶水解提取物中的蛋白分子量則

4、小于14kDa，可見酸水解提取法比較劇烈，將珍珠粉中的蛋白過度水解，導(dǎo)致提取物中蛋白含量較低。酶水解提取法較溫和，將珍珠粉中結(jié)合蛋白充分水解提取出，而且將提取物中大分子蛋白水解成小分子，導(dǎo)致提取物中蛋白含量較高且分子量都是小于14kDa，因此酸水解和酶水解法珍珠粉提取物中的蛋白均不是珍珠粉中的原型蛋白，傳統(tǒng)固液提取法蛋白提取率最低，超聲、微波輔助提取法蛋白提取率顯著提高，且提取物中的蛋白分子沒有被破壞，均是原型蛋白。
　　(4)研

5、究考察了不同提取方式所得到的珍珠粉提取物抗氧化活性（DPPH·自由基、ABTS+自由基清除能力和TRAP值）及其量效關(guān)系，結(jié)果顯示酶水解提取物具有很好的抗氧化活性，DPPH·清除作用的IC50為0.028g/mL（珍珠粉/純凈水），ABTS+清除作用的IC50為0.023g/mL，TRAP值在2g/mL下為152.13±1.66μg/mL.酸水解提取物的抗氧化活性最弱，其他三種方法得到的珍珠粉提取物對DPPH·自由基基本沒有清除作用，對

6、ABTS+自由基有較好的清除作用，TRAP值不高。可見珍珠粉常規(guī)固液提取、超聲或微波輔助的提取物抗氧化活性基本一致，而酶水解將大分子蛋白水解成小分子蛋白，顯著提高了提取物的抗氧化作用，而酸水解雖然也將大分子蛋白水解成小分子蛋白，但在透析除鹽過程中失去了很多小分子物質(zhì)，因此其抗氧化作用并不明顯。
　　(5)研究考察了不同提取方式所得到的珍珠粉提取物對B16F10細(xì)胞的增殖抑制活性影響，結(jié)果顯示通過常規(guī)固液提取、超聲輔助提取和微波輔助

7、提取所得珍珠粉提取物對B16F10基本沒有細(xì)胞毒性，酸水解和酶水解所得提取物具有顯著細(xì)胞毒性，其IC50分別為0.639、0.323g/mL，因此酸水解和酶解的珍珠粉提取物毒性值得關(guān)注，在使用過程中應(yīng)該在量上加以控制，其安全性也值得進(jìn)一步考察。
　　(6)研究考察了不同提取方式所得到的珍珠粉提取物對B16F10細(xì)胞中酪氨酸酶的活性影響，結(jié)果顯示常規(guī)固液提取、超聲輔助提取和微波輔助提取所得珍珠粉提取物在1g/mL下的抑制率分別為21

8、.85±3.42％、21.53±4.24％、26.28±3.01％，酸水解和酶水解提取物在0.1g/mL（細(xì)胞毒性不顯著的最高濃度）下的抑制率分別為6.10±2.8％和26.41±3.04％，但酶解提取物具有顯著的細(xì)胞毒性不能高劑量用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，其安全濃度下的活性明顯低于微波提取物活性，因此珍珠粉提取物在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮美白功效不僅有蛋白，還有其他非蛋白小分子物質(zhì)。
　　(7)研究了不同提取方式所得到的珍珠粉提取物對B16F10細(xì)胞

9、中黑色素生成活性的影響，結(jié)果顯示常規(guī)固液提取、超聲輔助提取和微波輔助提取所得珍珠粉提取物在1g/mL下的抑制率分別為33.81±2.68％、33.23±1.94％、38.16±2.53％，酸水解和酶水解提取物在0.1g/mL（細(xì)胞毒性不顯著的最高濃度）下的抑制率分別為16.80±2.14％和30.57±2.45％，其趨勢與酪氨酸酶抑制作用接近。
　　本研究表明珍珠粉提取物的確可以抑制酪氨酸酶活性并抑制黑色素生成，具有美白功效，微波