不同劑量異丙酚對(duì)防止大鼠皮瓣缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究通過(guò)對(duì)大鼠腹腔注射異丙酚，觀察其對(duì)大鼠島狀皮瓣缺血再灌注(ischemia-reperfusion，I/R)后組織學(xué)變化和成活面積的影響，以證實(shí)異丙酚在防止皮瓣缺血再灌注的作用，為提高皮瓣移植成活率，探索新的有效方法。并通過(guò)定量檢測(cè)皮瓣中的核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear factor-kappaB，NF-κB)和內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞間粘附分子1(intercellular adhesionmolecule1，ICAM-1)，初步探

2、討其對(duì)防止皮瓣缺血再灌注的作用機(jī)制，為其更廣泛的應(yīng)用臨床提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：選健康Wistar大鼠80只，雌雄不限，隨機(jī)分為四組，每組20只。P0組為對(duì)照組，P50組為異丙酚50mg/kg組，P100組為異丙酚100mg/kg組，P150組為異丙酚150mg/kg組，模型制作前分別向四組大鼠腹腔注射生理鹽水和異丙酚50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg。參照Manson等的方法制備大小為3cm×7cm以

3、腹壁淺血管為蒂的島狀皮瓣缺血再灌注模型。夾閉血管分支近端的股動(dòng)脈，結(jié)扎分支遠(yuǎn)端的股動(dòng)脈。持續(xù)缺血10h取出動(dòng)脈夾再通股動(dòng)脈。分別于掀起皮瓣即刻、I/R2h、I/R8h和I/R24h留取標(biāo)本，比色法檢測(cè)皮瓣組織中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)和髓過(guò)氧化物酶(Myeloper3xidase，MPO)的含量，免疫組化法檢測(cè)皮瓣組織中ICAM-1和NF-κB的表達(dá)，7天后測(cè)量皮瓣成活率。所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SAS8.0軟件進(jìn)行處理。組

4、間均數(shù)差異性比較采用單因素方差分析(oneway ANOVA)，有顯著差異者用最小顯著差異法(LSD)進(jìn)行兩兩比較，雙變量相關(guān)分析采用直線相關(guān)性分析。以P＜0.05為具有顯著性差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、皮瓣大體觀察：
　　 術(shù)后7d，各實(shí)驗(yàn)組皮瓣近段顏色淡紅，彈性較好，并可見少量毛發(fā)生長(zhǎng)。對(duì)照組中段和遠(yuǎn)段顏色棕黑色，彈性明顯下降，表面有褐色結(jié)痂；原位掀起皮瓣時(shí)見皮瓣出血較少，肉膜層呈紫黑色，肉膜下淡紅色滲出

5、液較多。P50組皮瓣中段顏色逐漸變暗，表面有少量褐色痂殼形成，無(wú)毛發(fā)生長(zhǎng)，彈性減退，遠(yuǎn)段呈黑褐色，彈性明顯下降，原位掀起皮瓣時(shí)見肉膜層呈暗紅色，肉膜層下可見少量新鮮出血及少量淡紅色滲出液。P100組和P150組皮瓣成活情況相近，中段顏色淡紅，有少量毛發(fā)生長(zhǎng)，遠(yuǎn)端和部分邊緣區(qū)呈黑褐色并有痂殼覆蓋，彈性較差，原位掀起皮瓣時(shí)見皮瓣出血活躍，出血量較多，肉膜層顏色淡紅，肉膜下無(wú)積血積液。
　　 根據(jù)大體觀察結(jié)果，各組皮瓣近段成活情況均好

6、于中遠(yuǎn)段，各實(shí)驗(yàn)組皮瓣中遠(yuǎn)段成活情況均明顯好于對(duì)照組。
　　 2、皮瓣成活率：
　　 P150組(68.9±7.2)％＞P100組（68.0±6.7）％＞P50組（52.9±6.7）％＞對(duì)照組(42.5±5.1)％，皮瓣成活面積實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較均有顯著性差異(F=78.52，P＜0.01)；兩兩比較，P150組與P100組組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，其它各組間兩兩比較均有顯著性差異(P＜0.01)。
　　

7、 3、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果：
　　 3.1、HE染色光鏡組織學(xué)觀察：
　　 術(shù)后7d，對(duì)照組：表皮、真皮及肉膜層完全壞死，結(jié)構(gòu)混亂不清，皮下可見大量的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。小劑量組：局限性表皮萎縮、變薄，真皮層細(xì)胞排列紊亂，皮下組織水腫，血管擴(kuò)張；中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。中高劑量組：皮膚各層結(jié)構(gòu)無(wú)明顯改變，皮下組織輕度水腫，血管周圍可見散在的局灶性中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 3.2、MDA檢測(cè)結(jié)果：
　　 I/R前皮瓣組織M

8、DA含量均在2.25nmol/mgp左右，I/R后MDA的含量隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸升高，I/R24h達(dá)高峰，四組MDA含量比較有顯著性差異(F=137.65，P＜0.01)。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較MDA含量明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；中、高劑量組低于低劑量組(P＜0.05)，但中、高劑量組之間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3.3、MPO檢測(cè)結(jié)果：
　　 I/R前皮瓣組織MPO含量均在0.41U/g左

9、右，I/R后MDA的含量隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸升高，I/R24h達(dá)高峰，四組MDA含量比較有顯著性差異(F=81.73，P＜0.01)。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較MPO含量下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；中、高劑量組低于低劑量組(P＜0.05)，但中、高劑量組之間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3.4、ICAM-1免疫組化染色結(jié)果：
　　 ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)主要位于中性粒細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，I/R2h

10、ICAM-1表達(dá)量極少，I/R8h顯著升高，I/R24h非常顯著升高，四組比較有顯著性差異(F=53.71，P＜0.01)。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較ICAM-1表達(dá)量明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)；實(shí)驗(yàn)組內(nèi)比較中、高劑量組明顯低于低劑量組(P＜0.05)；而中、高劑量組之間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3.5、NF-κB免疫組化染色結(jié)果：
　　 NF-κB陽(yáng)性表達(dá)主要位于中性粒細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，

11、強(qiáng)陽(yáng)性者細(xì)胞核內(nèi)也有表達(dá)。對(duì)照組于I/R2h達(dá)高峰，而實(shí)驗(yàn)組延遲到I/R8h表達(dá)最高，四組間表達(dá)峰值比較有顯著性差異(F=38.26，P＜0.01)。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較NF-κB表達(dá)量明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)；中、高劑量組明顯低于低劑量組(P＜0.05)，而中、高劑量組之間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。I/R24h，各組之間表達(dá)量均明顯下降，各組之間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3.6、NF-κB

12、和ICAM-1表達(dá)的相關(guān)性：
　　 各組皮瓣中NF-κB和ICAM-1表達(dá)均呈正相關(guān)，P0組(r=0.6066,P＜0.01),P50組(r=0.4876,P＜0.05),P100組(r=0.5632,P＜0.05),P150組(r=0.5955,P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、NF-κB的活化與ICAM-1的誘生在皮瓣缺血再灌注損傷的病理過(guò)程中起著重要作用，二者關(guān)系密切。
　　 2、異丙酚可能