三七皂甙和葡聚糖對心肌損傷的保護作用.pdf

1、背景：冠心病(CHD)已成為人類的頭號殺手，其最常見的臨床表現(xiàn)為心絞痛和心肌梗死，其最常見的病理生理改變?yōu)樾募∪毖獡p傷和缺血再灌注(I/R)損傷。對其防治一直是醫(yī)學研究的重點。 三七皂甙屬中藥的活血類藥，是治療冠心病心絞痛和心肌梗死的常用藥。但其治療作用的機理不甚清楚，有必要進行深入的研究。 葡聚糖(Glucan)是一種從真菌細胞壁分離出來的葡萄糖多聚體。因其具有加強抗腫瘤免疫及微生物感染免疫能力而被廣泛研究。葡聚糖為T

2、oll樣受體(Toll-likereceptor，TLR)所識別，有研究顯示其在抗心力衰竭治療中的作用，但其對心肌損傷是非有保護作用?如果有，其作用機理是什么?此對開發(fā)冠心病治療的新藥意義重大。 經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(PTCA)是治療冠心病的重大進展，但PTCA術本身可造成心肌的損傷，并可能影響預后。如能用三七皂甙減少PTCA術后的心肌損傷，對改善PTCA術的預后意義重大。 目的： 1.探討三七皂甙Rg1、Rb

3、1對心肌細胞缺血/再灌注(I/R)損傷的作用及其可能機制。 2.探討葡聚糖對心肌細胞I/R損傷的作用及其可能機制。 3.探討葡聚糖對Wistar大鼠心肌梗死后心功能和心肌梗死面積的影響。 4.探討三七總甙對冠心病患者經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術后心肌損傷的影響 方法：1.分離培養(yǎng)SD乳鼠心肌細胞，建立I/R模型。分組：①正常對照組；②I/R組：缺氧2h，復氧1h；③Rg1組：在缺氧前24h予三七皂甙Rgl1μm

4、ol/L；④ST+Rg1組：在缺氧前24h予Rg1及缺氧前1h予蛋白激酶C特異性阻斷劑Staurosporine(ST)10nmol/L；⑤Rb1組：在缺氧前24h予Rb11μmol/L；⑥ST+Rb1組：在缺氧前24h予Rb11μmol/L及缺氧前1h予ST10nmol/L。計算心肌細胞錐蟲藍攝取率、乳酸脫氫酶(LDH)活性、測定細胞內(nèi)游離鈣、細胞凋亡率(流式細胞儀法)。2.分離培養(yǎng)SD乳鼠心肌細胞，建立I/R模型。分組：①正常對照組

5、；②I/R組：缺氧2h，復氧1h；③低G組：在缺氧前24h予葡聚糖1μg/mL；④W+低G組：在缺氧前24h予葡聚糖1μg/mL及缺氧前1h予蛋白激酶B(Akt)特異性阻斷劑Wortmannin100nmol/L；⑤高G組：在缺氧前24h予葡聚糖5μg/mL；⑥W+高G組：在缺氧前24h予葡聚糖5μg/mL及缺氧前1h予Wortmannin100nmol/L。計算心肌細胞錐蟲藍攝取率、LDH活性、測定細胞內(nèi)游離鈣、細胞凋亡率(流式細胞法

6、)。 3.Wistar大鼠16只隨機分心肌梗死對照組和葡聚糖治療組，結扎左冠前降支制備急性心肌梗死模型，治療組在手術前1d、手術當日、手術后1d連續(xù)3d腹腔注射葡聚糖20mg/kg/d，術后2d及3wk二維超聲心動圖檢查心功能，包括左室舒張末期內(nèi)徑(LVDd)、左室收縮末期內(nèi)徑(LVDs)、左室射血分數(shù)(LVEF)，術后3wk后處死大鼠，三苯基四氮唑(TTC)染色測定心肌梗死面積。 4.對280例術前心肌肌鈣蛋白I(cT

7、nI)正常的行PTCA的冠心病患者隨機分組：對照組140例；治療組(術前予三七總甙片口服)140例，測定其術前，術后6，12，24，48，72h的血清cTnI水平及進行隨訪，分析相關因素，比較兩組間cTnI升高及出院后發(fā)生的心臟事件。 結果1.正常對照組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i和細胞凋亡率分別為(2.12±0.26)﹪、(49.59±3.75)u/mL、(110.9±12.8)和(2.07±0.25)﹪；I/R

8、組分別為(20.18±2.54)﹪、(191.8±17.3)u/mL、(344.4±32.9)和(22.53±2.6)﹪；Rg1組分別為(10.13±1.37)﹪、(68.33±4.20)u/mL、(193.9±12.8)和(8.98±1.54)﹪；ST+Rg1組分別為(16.84±1.96)﹪、(126.9±13.2)u/mL、(283.8±20.4)和(16.49±1.64)﹪；Rb1組分別為(10.31±1.55)﹪、(77.73

9、±5.21)u/mL、(200.3±12.6)和(9.58±1.36)﹪；ST+Rb1組分別為(18.56±1.74)﹪、(131.5±13.7)u/mL、(289.6±12.8)和(16.73±2.0)﹪。正常對照組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯低于其他各組(P值均＜0.05)；Rg1、Rb1組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯都低于I/R組(P均＜0.05)；ST+Rg1組的錐蟲藍

10、攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯高于Rg1組(P均＜0.05)；ST+Rb1組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯高于Rb1組(P均＜0.05)；Rg1組與Rb1組的各項指標無明顯差異(P均＞0.05)；ST+Rg1組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯低于I/R組(P均＜0.05)；ST+Rb1組的LDH活性、[Ca2]i、細胞凋亡率明顯低于I/R組(P＜0.05)，但錐蟲

11、藍攝取率與I/R組沒有明顯區(qū)別(P＞0.05)。 2.正常對照組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i和細胞凋亡率分別為(2.10±0.27)﹪、(49.81±3.62)u/mL、(111.4±11.5)和(2.14±0.29)﹪；I/R組分別為(20.34±2.23)﹪、(191.1±17.9)u/mL、(345.6±32.2)和(20.98±2.10)﹪；低G組分別為(10.03±1.36)﹪、(67.95±4.13)u

12、/mL、(195.0±10.9)和(8.98±1.54)﹪；W+低G組分別為(16.75±2.03)﹪、(125.6±16.4)u/mL、(284.4±19.8)和(16.49±1.64)﹪；高G組分別為(9.65±1.47)﹪、(75.37±5.63)u/mL、(191.5±18.5)和(9.01±1.63)﹪；W+高G組分別為(16.56±1.20)﹪、(118.3±16.23)u/mL、(291.5±15.5)和(15.48±1.

13、36)﹪。正常對照組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯低于其他各組(P值均＜0.05)；低G組、高G組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯都低于I/R組(P均＜0.05)；W+低G組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯高于低G組(P均＜0.05)；W+高G組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯高于高G組(P均＜0.05)；低G組與高G組的各項指標無

14、明顯差異(P均＞0.05)；ST+Rg1組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯低于I/R組(P均＜0.05)；W+低G組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯低于I/R組(P＜0.05)；W+高G組的錐蟲藍攝取率、LDH活性、[Ca2+]i、細胞凋亡率明顯低于I/R組(P＜0.05)。 3.術后2d兩組之間心功能(LVEF、LVDd、LVDs)無明顯差異(P均＞0.05)，術后3wk治療

15、組LVEF顯著高于對照組[(73.1±3.89)﹪vs(67.5±5.87)﹪](P＜0.05)；而LVDd明顯小于對照組[(5.96±0.18)mmvs和(6.40±0.14)mm](P＜0.05)；LVDs也明顯小于對照組[(3.75±0.23)mmvs和(4.28±0.24)mm](P＜0.05)；3wk后治療組心肌梗死面積明顯比對照組小[(25.4±1.58)﹪vs(28.4±1.24)﹪](P＜0.05)。 4.PTC

16、A術對照組140例患者中有27例術后cTnI升高，三七總甙治療組140例患者中有14例術后cTnI升高，治療組cTnI升高數(shù)明顯少于對照組(P＜0.05)。兩組隨訪的心臟事件無顯著差異(P＞0.05)。 結論 1.三七皂甙Rg1、Rb1對SD乳鼠心肌細胞I/R損傷有保護作用；其保護作用部分是通過激活蛋白激酶C通路實現(xiàn)的；在保護心肌I/R損傷的強度上，三七皂甙Rg1和Rb1相當。 2.葡聚糖對SD乳鼠心肌細胞I/R