小鼠著床位點(diǎn)基因表達(dá)系列分析.pdf

1、胚胎著床涉及胚胎和子宮之間一系列復(fù)雜的相互作用，許多基因參與其中。盡管已利用寡核苷酸芯片、cDNA芯片、DDRT-PCR等各種不同的技術(shù)篩選到一些著床相關(guān)基因，但胚胎著床的機(jī)制仍不清楚。為了全面了解胚胎著床相關(guān)分子和發(fā)現(xiàn)新的胚胎著床相關(guān)信號(hào)通路，我們首次應(yīng)用基因表達(dá)系列分析(SAGE)技術(shù)，分析了小鼠早期妊娠第五天非著床位點(diǎn)和著床位點(diǎn)子宮的基因表達(dá)譜。 我們利用早期妊娠小鼠第五天的子宮分別構(gòu)建了非著床位點(diǎn)和著床位點(diǎn)標(biāo)簽長(zhǎng)10bp

2、的兩個(gè)SAGE文庫(kù)，非著床位點(diǎn)測(cè)序的標(biāo)簽數(shù)為51306個(gè)，對(duì)應(yīng)16964個(gè)特異標(biāo)簽，著床位點(diǎn)測(cè)序的標(biāo)簽數(shù)為53214個(gè)，對(duì)應(yīng)16733個(gè)特異的標(biāo)簽。為了提高SAGE庫(kù)中標(biāo)簽對(duì)應(yīng)基因的比例，我們利用同一個(gè)SAGE文庫(kù)的序列文件，構(gòu)建了標(biāo)簽長(zhǎng)11bp的兩個(gè)文庫(kù)，非著床位點(diǎn)的標(biāo)簽總數(shù)為48121，對(duì)應(yīng)16677個(gè)特異標(biāo)簽，著床位點(diǎn)的標(biāo)簽總數(shù)為50227，對(duì)應(yīng)16696個(gè)特異的標(biāo)簽。共有1039個(gè)標(biāo)簽在非著床位點(diǎn)特異性表達(dá)，1252個(gè)標(biāo)簽在著床

3、位點(diǎn)特異性表達(dá)。根據(jù)p值，195個(gè)標(biāo)簽在非著床位點(diǎn)顯著上調(diào)，其中100個(gè)標(biāo)簽是單一匹配的，261個(gè)標(biāo)簽在著床位點(diǎn)顯著上調(diào)，其中127個(gè)是單一匹配的。 為了驗(yàn)證SAGE結(jié)果的可信性，我們隨機(jī)選取14個(gè)單一匹配的標(biāo)簽對(duì)應(yīng)的基因(其中7個(gè)在著床位點(diǎn)上調(diào)，7個(gè)下調(diào))進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證，所有這些基因的RT-PCR結(jié)果與SAGE結(jié)果中的表達(dá)趨勢(shì)一致。我們利用原位雜交對(duì)SAGE結(jié)果也進(jìn)行了驗(yàn)證。與非著床位點(diǎn)相比，1810014L12Rik、

4、Psmb5、Cd63、Npm1、Fads3和Tagln2在著床位點(diǎn)處的腔上皮下基質(zhì)細(xì)胞中高表達(dá)。Ddx39在第5天著床位點(diǎn)腔上皮下基質(zhì)中強(qiáng)表達(dá)，在非著床位點(diǎn)及假孕第5天未檢測(cè)到雜交信號(hào)。利用假孕及延遲著床模型發(fā)現(xiàn)，Ddx39的表達(dá)受正在著床的活性胚泡的誘導(dǎo)。在卵巢切除的小鼠中，Ddx39的表達(dá)受雌激素顯著上調(diào)，孕酮對(duì)Ddx39的表達(dá)沒(méi)有明顯影響。這表明Ddx39可能在胚胎著床過(guò)程中發(fā)揮重要作用。 總之，我們成功地構(gòu)建了早期妊娠小