中國林蛙抗菌肽chensinin-1b對革蘭氏陰性菌的殺菌機制及抑制LPS誘導炎癥反應的研究.pdf

1、單位代碼：10165遼寧師范大學博士研究生學位論文題目：中國林蛙抗菌肽chensinin1b對革蘭氏陰性菌的殺菌機制及抑制LPS誘導炎癥反應的研究，～●P一●●●●●一一1ltle：1hemechanismagainstgramnegativebacterlaandtheettect0nlipopolysacchaftde—inducedinflammatoryresponsesofchensinin—lb，anantimicrobia

2、lpeptideanaloguefromChinesebrownfrog，Ranachensinensis作者姓名：學科、專業(yè)：研究方向：導師姓名：細胞生化2016年5月遼寧師范大學博士學位論文摘要脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)是革蘭陰性菌細胞壁外膜上的主要成分，不但能夠阻礙抗菌藥物進入細菌內(nèi)部發(fā)揮抗菌作用，而且還是引發(fā)炎癥反應的主要誘因。失控的局部炎癥反應會導致全身性炎癥或膿毒癥等疾病，對組織和器官引起不同程度

3、的損傷，嚴重的甚至會導致生物體死亡。目前還沒有開發(fā)出能夠有效中和LPS的成熟藥物?？咕膩碓磸V泛，作為生物體先天免疫系統(tǒng)的重要成員，具有廣譜抗菌活性且不易產(chǎn)生耐藥性等特點，某些抗菌肽還具有中和LPS及調(diào)節(jié)免疫功能，是研發(fā)拮抗LPS抗炎藥物的理想候選。Chensinin1是本實驗室從中國林蛙(Ranachensinensis)皮膚分泌物中分離純化得到的一種含有18個氨基酸的短肽，該抗菌肽具有分子量小，陽離子性強等特征，對革蘭氏陽性菌有較好

4、的抗菌活性。前期研究中對chensinin1進行改造，以疏水性較強的色氨酸替換了疏水性較弱的甘氨酸，并調(diào)整氨基酸序列增強了其兩親性得到了它的改造肽chensinin1b，其抗菌活性尤其是對革蘭氏陰性菌的抗菌能力與模板肽相比有顯著的提高。本文首先研究了chensinin1b對革蘭氏陰性菌選擇性殺菌活性的分子機制。NPN檢測chensinin1b對細菌細胞壁外膜的滲透性，結果表明chensinin1b對大腸桿菌外膜有較強的滲透能力，chen

5、sinin1相對較弱。制備去除細胞壁外膜的大腸桿菌原生質(zhì)體，兩種抗菌肽對原生質(zhì)體的去極化作用和抗菌活性與大腸桿菌相比均有不同程度提高，而對LPS環(huán)境中的原生質(zhì)體的去極化及抗菌能力又有所下降，其中chensinin1下降的程度較chensinin1b更大，說明chensinin1無法像chensinin1b一樣作用于LPS，提示chensinin1和chensinin1b對革蘭氏陰性細菌抗菌活性的不同，是由于二者對革蘭氏陰性菌細胞壁外膜中

6、LPS作用程度不同引起的。等溫滴定量熱(isothermaltitrationcalorimetry。ITC)實驗和Zeta電勢實驗測定chensinin1b與LPS之間的相互作用。ITC顯示，chensinin1b與LPS的結合是一個先放熱后吸熱的過程，先后由焓和熵驅(qū)動。表明chensinin1b先以靜電作用和LPS吸附結合，再以疏水作用插入到LPS中。通過分析熱力學參數(shù)，得出結論chensinin1b的結合系數(shù)較大，說明與LPS有較