沉默miR482a增強番茄對晚疫病及鹽、旱的抗性.pdf

1、MicroRNA（miRNA）是一類長約22 nt的非編碼RNA，是生物體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子之一，參與調(diào)節(jié)植物的生長發(fā)育以及脅迫響應(yīng)等過程。番茄（Solanum lycopersicum）是一種世界范圍內(nèi)廣泛種植的重要經(jīng)濟(jì)作物，由致病疫霉侵染（Phytophthora infestans）造成的番茄晚疫病和鹽、旱等逆境脅迫，常給番茄的生產(chǎn)帶來巨大損失。miR482是一類與抗病相關(guān)的，在茄科植物中高表達(dá)的保守性miRNA，其靶基因編碼

2、的NBS-LRR蛋白是植物體內(nèi)一類參與生物脅迫響應(yīng)的免疫受體蛋白。與過表達(dá)植物miRNA技術(shù)相比，沉默miRNA的技術(shù)目前也已成為研究的一個熱點，STTM技術(shù)、Anti-amRNA技術(shù)等新技術(shù)的涌現(xiàn)表明該領(lǐng)域已逐漸成熟。本研究采用兩種miRNA沉默技術(shù)，抑制番茄中miR482a的表達(dá)，分析沉默miR482a對番茄晚疫病及鹽、旱抗性的影響。
　　首先，本研究利用生物信息學(xué)手段預(yù)測了番茄中miR482a的上游啟動子元件及其靶基因，并分

3、析了其在病原菌、激素、鹽和旱脅迫下的表達(dá)特性。結(jié)果表明，miR482a對上述所有脅迫均會做出響應(yīng)。
　　其次，本研究采用實驗室前期構(gòu)建的兩種miR482a沉默載體，通過瞬時侵染和穩(wěn)定表達(dá)兩種方法將沉默載體導(dǎo)入番茄，成功構(gòu)建了瞬時沉默系統(tǒng)并獲得了穩(wěn)定沉默的轉(zhuǎn)基因番茄植株。分析發(fā)現(xiàn)，沉默載體能夠抑制番茄體內(nèi)miR482a的表達(dá)，促進(jìn)其靶基因的表達(dá)。
　　最后，采用病原菌、高鹽和干旱等生物和非生物脅迫對穩(wěn)定沉默的轉(zhuǎn)基因番茄植株進(jìn)行