血清學(xué)聯(lián)合核酸檢測在獻(xiàn)血者血液篩查中的應(yīng)用及隱匿性乙肝感染病毒變異分析.pdf

1、目的：
　　1.對溫州地區(qū)無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行HBV、HCV、HIV血清學(xué)、核酸聯(lián)合檢測，全面評估兩者在降低輸血相關(guān)傳染性疾病中的關(guān)系。
　　2.了解溫州地區(qū)HBsAg-/HBV-DNA+在獻(xiàn)血者人群中的分布特征，為無償獻(xiàn)血宣傳招募工作提供理論指導(dǎo)。
　　3.對HBsAg-/HBV-DNA+獻(xiàn)血者血清學(xué)模式、病毒檢測CT值進(jìn)行比較分析，為全面了解隱匿性乙肝提供依據(jù)。
　　4.通過對隱匿性乙肝感染者S區(qū)基因變異位

2、點(diǎn)的分析及相關(guān)蛋白空間結(jié)構(gòu)的預(yù)測，探討無償獻(xiàn)血者隱匿性乙肝感染的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　方法：
　　1.對溫州市中心血站及分支機(jī)構(gòu)2014年10月至2015年10月采集的無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本60758份，采用ELISA方法用兩種不同廠家試劑檢測乙肝表面抗原、丙肝抗體、人類免疫缺陷病毒抗原/抗體，兩種試劑均陽性采用單人份核酸擴(kuò)增試驗(NAT)檢測HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA，兩種試劑均陰性或單試劑陽性進(jìn)行六人份混

3、樣NAT檢測，混樣陽性再進(jìn)行單人份拆分檢測，比較兩種檢測方法檢出率的符合性。
　　2.對HBsAg-/HBV-DNA+獻(xiàn)血者按不同性別、年齡、學(xué)歷、獻(xiàn)血次數(shù)進(jìn)行分組，比較各組間HBV-DNA陽性率的分布特征。
　　3.HBsAg-/HBV-DNA+樣本進(jìn)行兩對半補(bǔ)充試驗，分析血清學(xué)感染特征;同時對HBsAg-/HBV-DNA+、HBsAg+/HBV-DNA+兩組間單檢CT值進(jìn)行比較，分析兩者病毒拷貝數(shù)之間的差異;并對兩對半全

4、陰獻(xiàn)血者進(jìn)行跟蹤隨訪，追蹤過程中出現(xiàn)HBsAg陽轉(zhuǎn)確證為窗口期感染，未陽轉(zhuǎn)視為隱匿性HBV感染。
　　4.應(yīng)用巢氏PCR技術(shù)對追蹤試驗確認(rèn)的隱匿性乙肝感染者S區(qū)基因進(jìn)行擴(kuò)增和序列測定，并將測得基因片段與NCBI GeneBank數(shù)據(jù)庫做序列比對分析，明確突變位點(diǎn)，同時進(jìn)行蛋白模型構(gòu)建，根據(jù)得出的模型，結(jié)合突變的氨基酸進(jìn)行空間等結(jié)構(gòu)的分析。
　　結(jié)果：
　　1.60758份無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中，HBV、HCV、HIV血清

5、學(xué)和核酸檢測均陰性的60256例;血清學(xué)與核酸檢測均陽性139例;血清學(xué)陽性核酸陰性283例;其中血清學(xué)陰性核酸陽性80例，均為HBV-DNA陽性，尚未發(fā)現(xiàn)HCV-RNA和HIV-RNA陽性樣本。HBV、HCV、HIV ELISA雙試劑陽性與核酸陽性符合率分別為79.3％、52.3％、100％，單試劑陽性與核酸陽性符合率為19.3％、0％、0％。HCV、HIV血清學(xué)雙試劑陽性S/CO＞5者其與核酸陽性符合率要遠(yuǎn)高于S/CO≤5者。

6、>　　2.無償獻(xiàn)血者HBsAg-/HBV-DNA+陽性率隨年齡增長而增高，男性高于女性，高學(xué)歷陽性率低于低學(xué)歷人群，重復(fù)獻(xiàn)血人群高于首次獻(xiàn)血人群。
　　3.HBsAg-/HBV-DNA+無償獻(xiàn)血者乙肝兩對半血清學(xué)檢測模式多樣，以抗-HBc陽性為主。從HBV-DNA單檢CT值比較來看，HBsAg-/HBV-DNA+組要明顯高于HBsAg+/HBV-DNA+組，同時對HBV-DNA+但兩對半全陰獻(xiàn)血者追蹤隨訪確認(rèn)兩名窗口期感染病例。<

7、br>　　4.追蹤試驗確認(rèn)的4例隱匿性乙肝感染者，有3例巢氏PCR擴(kuò)增出S區(qū)基因序列，突變分析發(fā)現(xiàn)有2例HBV S區(qū)氨基酸發(fā)生突變，分別為136號位色氨酸突變成丙氨酸，140號位脯氨酸突變?yōu)榻M氨酸。蛋白預(yù)測提示氨基酸突變影響抗原決定簇空間構(gòu)象，可能造成抗體結(jié)合位點(diǎn)改變或識別能力減弱，導(dǎo)致血清學(xué)檢測假陰性。
　　結(jié)論：
　　1.血清學(xué)檢測、核酸檢測兩種技術(shù)在輸血相關(guān)傳染病檢測中不是簡單的替代關(guān)系，而是一種互補(bǔ)關(guān)系，減少任何一種