復方解毒化瘀方對P388-VCR細胞Bcl-2表達影響的研究.pdf

1、目的:
　　本研究擬建立P388/VCR細胞白血病多藥耐藥模型，予小、中、大劑量的復方解毒化瘀方聯合長春新堿(VCR)逆轉白血病多藥耐藥，用流式細胞術檢測B淋巴細胞瘤-2基因(Bcl-2)的表達，探討復方解毒化瘀方逆轉白血病多藥耐藥可能的分子機制。
　　方法:
　　(1)細胞的培養(yǎng):將P388/VCR細胞在37℃、5％CO2條件的培養(yǎng)箱內進行培養(yǎng)，按常規(guī)細胞傳代方法進行傳代。
　　(2)實驗分組:所購裸鼠隨機分成

2、:ZC:正常對照組、MX:模型組、VZ:長春新堿組、XJ:小劑量復方解毒化瘀方+VCR組、ZJ:中劑量復方解毒化瘀方+VCR組、DJ:大劑量復方解毒化瘀方+VCR組。
　　(3)造模及用藥:取對數生長期的P388/VCR細胞，含2×106個、量為0.2ml/只于裸鼠腹腔接種。造模后開始觀察觀察各組裸鼠精神、覓食、皮膚色澤、活動度，體重、腹水情況;取腹水、外周血及骨髓涂片，吉姆薩染色，油鏡下觀察細胞形態(tài)，計算白血病細胞數及所占百分比

3、，判斷造模是否成功;分別給裸鼠蒸餾水、生理鹽水灌胃，VCR腹腔注射，小、中、大劑量復方解毒化瘀方灌胃及VCR，長春新堿:（1次/2d X5次），復方解毒化瘀方:（1次/d×10次）;造模開始后查外周血(1次/2d)，測量瘤塊及觀察裸鼠一般情況。
　　(4)用MTT法分別檢測P388/VCR細胞株體內外的耐藥倍數。
　　(5)觀察用藥前、后裸鼠的精神、覓食、皮膚色澤、活動度，體重、腹水，測量裸鼠瘤塊體積情況，抽取腹水、外周血，

4、骨髓涂片，觀察腹水、外周血及骨髓原始+早幼粒細胞百分比。
　　(6)各組用藥結束后，次日眼球取血，用流式細胞術檢測各組Bcl-2表達。
　　結果:
　　(1)裸鼠接種后，腹水形成時間:4.50±0.50天，瘤塊形成時間:5.63±0.77天，成瘤率83％，接種前各組體重隨時間延長，體重明顯增加，接種后隨著裸鼠腹水、瘤塊形成時繼續(xù)增加，隨實驗進程裸鼠精神、飲食變差，抽取腹水，多次外周取血，裸鼠體重開始下降，在用藥后體重緩

5、慢下降。
　　(2)MTT法測得P388/VCR細胞株并計數出:體外耐藥倍數5.68倍，接種體內后其耐藥倍數為4.6倍，其耐藥性仍保持。
　　(3)接種后裸鼠腹水、瘤塊形成時，抽取腹水、外周血及骨髓涂片的白血病細胞計數均＞200個/片。
　　(4)流式細胞術檢測裸鼠外周血細胞Bcl-2表達，ZC Bcl-2的表達甚少，MX的Bcl-2表達最高，VZ與XJ的Bcl-2表達均不同程度下降，XJ與ZJ、DJ相比有顯著差異(P

6、＜0.01)，ZJ較XJ的Bcl-2表達下降，DJ與ZJ相比具有差異(P＜0.05)，DJ的Bcl-2表達進一步下降，說明與一定濃度的復方解毒化瘀方藥液作用呈負相關。
　　結論:
　?、貾388/VCR細胞株接種于裸鼠體內，其耐藥性仍保持;
　?、趶头浇舛净龇侥孓D白血病耐藥細胞株P388/VCR的機制之一可能與下調Bcl-2的超量表達相關;
　?、蹚头浇舛净龇娇山档蚉388/VCR耐藥細胞裸鼠模型Bcl-2的