GLP-1受體在大鼠肝星狀細胞的表達及利拉魯肽對高糖條件下大鼠肝星狀細胞增殖的作用.pdf

1、目的:目前非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver diseaseNAFLD)的發(fā)生日益增加。NAFLD包括從肝臟脂肪變性到脂肪性肝炎，進而發(fā)展為肝臟纖維化，最終至肝硬化的一系列病變。但是目前尚沒有藥物可以治療NAFLD。胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide-1 GLP-1)是由腸道內分泌細胞L細胞分泌的一種重要的腸促胰島素，GLP-1類似物利拉魯肽作為降糖藥物已廣泛的應用于臨床，

2、其胰腺外作用是目前糖尿病領域關注的熱點。GLP-1受體介導的抗臟器纖維化作用已得到初步證實，其機制非常復雜，在不同的臟器可能存在不同的作用通路，并且一些參與臟器纖維化的關鍵細胞如肝星狀細胞（hepatic stellate cells HSC）等最有可能參與其中。那么作為肝纖維化的關鍵細胞HSC上是否存在GLP-1受體的表達呢？本實驗旨在探討GLP-1受體在大鼠HSC是否表達及GLP-1類似物利拉魯肽對高糖條件下大鼠HSC的作用，從而探

3、討其對于NAFLD及肝臟纖維化的作用。
　　方法:
　　1、大鼠HSC的培養(yǎng):大鼠HSC復蘇后接種于無菌塑料培養(yǎng)瓶中，37℃、體積分數為5％的CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含體積分數為10％胎牛血清的1640，每天換液1次，48小時后提取樣本于顯微鏡下進行形態(tài)學鑒定，并進行后續(xù)實驗分析。
　　2、Western法檢測GLP-1受體蛋白在大鼠HSC的表達。
　　3、Real-time PCR法檢測大鼠HS

4、CGLP-1受體mRNA的表達。
　　4、分組干預:將培養(yǎng)48小時的大鼠HSC分7組分別為正常糖對照組(5.5 mmol/L)、高滲對照組（5.5mmol/L低糖+19.5mmol/L甘露醇）、高糖對照組（25.0mmol/L）、高糖+低濃度利拉魯肽組（50nmol/L）、高糖+中濃度利拉魯肽組（100nmol/L）、高糖+高濃度利拉魯肽組(200nmol/L)、正常糖+高濃度利拉魯肽組(200nmol/L)。
　　5、MT

5、S法檢測上述7組細胞的增殖情況。
　　6、數據分析:所得數據采用均數±標準差((x)±s)表示，統(tǒng)計分析運用SPSS13.0軟件。采用方差分析對各個時間點的7組的光密度(opticaldensity OD)值進行比較，采用Bonferroni法進行兩兩比較，探討同一時間點具體不同的組的差別。對不同時間點的高糖+高濃度利拉魯肽采取配對t檢驗，探討時間對該組OD值得影響。P＜0.05為統(tǒng)計學差異有意義。
　　結果:
　　1

6、、大鼠HSC形態(tài)學鑒定
　　倒置顯微鏡下可以觀察到活化的HSC為扁平狀，胞體大，胞體周圍有突起。
　　2、Western blot及Real-time PCR檢測GLP-1受體均在大鼠HSC上有表達。5個樣本均測得GLP-1受體蛋白及mRNA表達。
　　3、HSC的增殖:高糖組與正常糖組差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。高糖+高濃度利拉魯肽干預組作用48小時、72小時時較高糖對照組增殖降低(p＜0.05)，但高于正常糖

7、對照組(p＜0.05)，高濃度利拉魯肽組(200nmol/L)增殖低于低(50nmol/L)、中(100nmol/L)濃度利拉魯肽組(p＜0.05)，但低、中濃度的利拉魯肽組增殖差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。高滲對照組及正常糖+高濃度利拉魯肽組同正常糖對照組比較增殖差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。
　　結論:
　　1、大鼠HSC上有GLP-1受體的表達。
　　2、高糖可促進大鼠HSC增殖，而利拉魯肽可抑制高糖作用