椎間盤源性下腰痛的臨床與基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的:探討痛性椎間盤神經(jīng)纖維內(nèi)生長(zhǎng)的機(jī)制,以此為根據(jù)建立一個(gè)更為符合人類椎間盤退變病理特性的動(dòng)物模型。
　　 方法:分別用正常、內(nèi)破裂(IDD)及腰椎突出椎間盤(LIDP)髓核或纖維環(huán)的組織中提取的聚集蛋白聚糖培養(yǎng)人骨髓神經(jīng)母細(xì)胞瘤(SH-SY5Y)。檢測(cè)比較神經(jīng)細(xì)胞軸突發(fā)生率及軸突長(zhǎng)度；將三種不同來(lái)源的髓核或纖維環(huán)的組織20mg培養(yǎng)于24孔板中,用放射性同位素35S-sulfate和3H-serine標(biāo)記新合成的蛋白聚糖分子,

2、提取聚集蛋白聚糖(A1D1蛋白聚糖),凝膠色譜分析其中硫酸軟骨素(CS)及硫酸角質(zhì)素(KS)鏈的變化特征；利用免疫組織化學(xué)、免疫熒光、Western blot及RT-PCR檢測(cè)p16INK4a和Fas基因在三種椎間盤組織中的表達(dá),利用RNA干擾在體外進(jìn)一步分析p16INK4a及Fas基因在椎間盤細(xì)胞中的功能；在CT引導(dǎo)下將細(xì)胞衰老誘導(dǎo)劑5-溴脫氧尿核苷(BrdU)注入羊的腰2-3、腰4-5、腰6-7椎間盤中心部位,腰3-4及腰7骶1以及

3、注射磷酸鹽緩沖溶液(PBS)的腰1-2、腰5-6椎間盤做為對(duì)照組,在不同時(shí)間點(diǎn)行影像學(xué)、組織學(xué)、生物化學(xué)及CT/椎間盤造影檢測(cè)。
　　 結(jié)果:IDD和LIDP來(lái)源的聚集蛋白聚糖培養(yǎng)基中,神經(jīng)細(xì)胞軸突發(fā)生率及長(zhǎng)度較之正常對(duì)照組有明顯增加；LIDP中CS鏈的數(shù)量和長(zhǎng)度明顯減少,而IDD只有CS鏈的數(shù)量的明顯減少,KS鏈無(wú)明顯變化；細(xì)胞衰老基因p16INK4a及凋亡關(guān)鍵基因Fas在退變晚期的LIDP中的表達(dá)均有明顯增高,而在退變?cè)缙诘?/p>

4、IDD中只有p16INK4a的表達(dá)增高；以細(xì)胞衰老誘導(dǎo)劑BrdU處理的椎間盤中,MRI影像T2像信號(hào)強(qiáng)度逐漸減弱、椎間隙有狹窄及上下椎體牽張骨刺的形成、有類似于人類椎間盤退變及內(nèi)破裂的征象、椎間盤正常結(jié)構(gòu)及細(xì)胞密度發(fā)生進(jìn)行性破壞和減少、細(xì)胞的增殖能力、含水量和蛋白聚糖含量均有不斷減少。而正常及注射PBS的對(duì)照細(xì)胞椎間盤在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間未見(jiàn)明顯變化。
　　 結(jié)論:椎間盤細(xì)胞衰老所致的功能減退,造成椎間盤內(nèi)主要基質(zhì)成分聚集蛋白多糖內(nèi)C