納米細菌在Ⅲ型前列腺炎和前列腺結石發(fā)生中的作用研究.pdf

1、背景及目的： 在四種類型的前列腺炎中，只有Ⅲ型前列腺炎迄今為止病因不清，是臨床上最常見的前列腺炎。雖然人們對Ⅲ型前列腺炎患者前列腺液(expressed prostatic secretion，EPS)進行了常規(guī)檢查、細菌培養(yǎng)，仍未能發(fā)現(xiàn)致病菌，故治療困難。為此人們針對感染以外的病因進行了大量的探索，提出了多種假說，但均不能完全解釋該病發(fā)生的臨床特點。因此，積極探索Ⅲ型前列腺炎的病因對指導臨床工作具有重要意義。 臨床上在

2、Ⅲ型前列腺炎患者中常觀察到下列現(xiàn)象：患者EPS中存在炎癥或炎癥標記物陽性；抗感染治療時常有效。這啟示其中可能有不被常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)的感染因素存在。另外，Ⅲ型前列腺炎患者前列腺中常發(fā)現(xiàn)結石。這種前列腺結石是在前列腺腺泡和腺管內(nèi)形成的真性結石，它形成的原因也不清楚。在其形成的過程中是否也有不為我們認知的感染性病因存在同樣值得我們探索。 新發(fā)現(xiàn)的納米細菌(Nanobacteria，NB)及其獨特的生理和致病特點為闡明Ⅲ型前列腺炎和前列腺結

3、石的病因提供了一條嶄新的思路。 NB是新發(fā)現(xiàn)的納米級球菌，在普通的微生物培養(yǎng)條件下不能生長，只能在細胞培養(yǎng)基上生長。常規(guī)方法不能檢測，具有礦化的特性。它能感染人體內(nèi)多種細胞，一方面釋放毒素引起組織炎癥，同時也能導致被感染細胞發(fā)生骨骼外鈣化(病理性鈣化)。已有實驗證實它能在動物膽囊和腎臟內(nèi)引起形成結石。目前臨床上已有人從Ⅲ型前列腺炎患者的EPS和前列腺結石中分離、培養(yǎng)出了NB。抗NB治療后患者臨床癥狀明顯減輕，前列腺內(nèi)的結石變小

4、甚至消失。因此推斷NB可能是Ⅲ型前列腺炎和前列腺結石的一個重要病因。以上研究為Ⅲ型前列腺炎和前列腺結石發(fā)生機制研究提供了全新的切入點，但未見有更深入的實驗來驗證。據(jù)此，我們首先擬用Ⅲ型前列腺炎患者的EPS和前列腺結石進行NB的分離、培養(yǎng)，進一步證實其中是否存在NB及其感染的情況。其次用培養(yǎng)的NB感染動物前列腺，觀察其中的病理變化，驗證NB在Ⅲ型前列腺炎和前列腺結石發(fā)生中可能的病因學作用。最后和動物大腸桿菌及盆腔淤血性慢性前列腺炎進行比較

5、，尋找它們致病的異同點，為臨床診治工作提供實驗依據(jù)。 方法： 1.本研究擬從Ⅲ型前列腺炎患者的EPS和前列腺結石中分離培養(yǎng)NB，并采用間接免疫熒光、鈣染色、電鏡觀察、16s rRNA基因擴增及測序等方法對培養(yǎng)物進行鑒定。 2.選用成年雄性SD大鼠為實驗對象，建立動物模型，分為不同實驗組。對照組由SD大鼠尿道逆行注入生理鹽水于前列腺尿道部，模型組和治療組則分別注入NB，造成大鼠前列腺感染。4周后分別處死部分對照和模

6、型組SD大鼠，觀察前列腺組織的病理變化。同時稱取大鼠體重、前列腺重量，檢測組織中白細胞、卵磷脂小體及相關的細胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)變化。其余動物繼續(xù)喂養(yǎng)。治療組4周后予四環(huán)素抗NB治療4周。第8周后將所有動物處死，進行相同的檢測。另外，將所有實驗大鼠前列腺組織處理后進行再分離培養(yǎng)，觀察有無NB生長。 3.制作SD大鼠NB、大腸桿菌感染及慢性盆腔淤血慢性前列腺炎模型，分別在4周、8周時進行病理觀察，組織中白細胞

7、、卵磷脂小體及相關的細胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)檢測。 結果： 1.單抗間接免疫熒光染色對NB進行鑒定，55例Ⅲ型前列腺炎患者中26例EPS標本存在NB感染，感染的陽性率為48.3％。40例正常對照組中有2例存在NB，陽性率為5％。二組比較有明顯差異(P<0.01)。30例結石標本中，有17例存在NB，陽性率為56.7％。 2.電鏡下觀察，NB呈球狀或球棒狀，大小約100～500nm，絕大多數(shù)聚集

8、成簇，菌體周圍有一層黑色的物質(zhì)包繞，并有羥基磷灰石分布。 3.茜素紅染色觀察結果：細菌絕大多數(shù)聚集成簇，個體極其微小。 4.特異性片段的測序結果經(jīng)軟件與NB的16SrRNA序列進行比較后發(fā)現(xiàn)相似度為98％。 5.NB感染4周后，SD大鼠前列腺呈慢性炎癥改變。8周后感染持續(xù)存在，組織明顯纖維化，且掃描電鏡下發(fā)現(xiàn)前列腺內(nèi)有結石形成。治療組中前列腺慢性炎癥明顯減輕，未見結石。對照組無變化。 6.NB感染4周、8

9、周后，各組大鼠體重無明顯差異。但模型組前列腺重量、組織中白細胞、卵磷脂小體數(shù)量及相關的細胞因子(TqqF-α、IL-1β、IL-6)與對照組比較均有明顯差異(P<0.05)?？垢腥局委?周后，治療組與模型組比較，以上各項指標均有明顯差異(P<0.05)，與對照組比較無差異。 7.NB感染的模型組動物前列腺組織再培養(yǎng)均有NB生長，對照組中無NB生長。 8.4周后大腸桿菌組和NB組大鼠前列腺均呈慢性炎癥改變，但NB組較大腸桿

10、菌組稍輕，盆腔靜脈淤血組炎癥不明顯。8周后三組均呈明顯慢性炎癥改變，掃描電鏡檢查僅在納米細菌感染的前列腺中發(fā)現(xiàn)結石，其余三組中均未發(fā)現(xiàn)結石。 9.經(jīng)過不同的處理，4周、8周后，各組大鼠體重無明顯差異。4周后，大腸桿菌組和NB組與盆腔靜脈淤血組和對照組比較，前列腺重量及卵磷脂小體明顯減少，組織中白細胞及相關的細胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平明顯升高，差異顯著(P<0.05)。8周后，大腸桿菌組、NB組和盆腔靜脈淤血

11、組三組間上述觀察指標均無差異；同對照組比較，前列腺重量及卵磷脂小體明顯減少，EPS中白細胞及相關的細胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平明顯升高，差異顯著(P<0.05)。 結論及展望： 1.Ⅲ型前列腺炎患者EPS和前列腺結石中存在NB，并且有較高的陽性率。NB感染與Ⅲ型前列腺炎和結石的發(fā)生存在著密切的關系。 2.NB感染能引起大鼠前列腺慢性炎癥。四環(huán)素抗感染治療，能明顯減輕前列腺的慢性炎癥。