Ⅲ型前列腺炎患者納米細菌快速檢測方法的研究.pdf

1、背景及目的：
　　 根據1995年NIH分類，Ⅲ型前列腺炎即非細菌性前列腺炎，或者又稱慢性前列腺炎/ 慢性盆腔疼痛綜合癥(chronic prostatitis/ chronic pelvic cavity painsymptom，CP/CPPS)。區(qū)別于I 型、II 型前列腺炎是前列腺液(expressed prostatic secretion,EPS)鏡檢和培養(yǎng)均未發(fā)現細菌，而IV 型前列腺炎為隱匿性前列腺炎。III 型前

2、列腺炎是男性的常見病，多發(fā)病，約占泌尿外科門診的1/4。但是病因不明確，因此治療效果不佳。近來人們針對III 型前列腺炎各種可能病因，如神經系統(tǒng)、自身免疫、雄激素受體等相關因素，進行了廣泛深入研究，但均未能取得一致結論，也不能合理解釋III型前列腺炎各種臨床癥狀及輔助檢查結果。臨床上常用抗生素、a-受體阻滯劑等藥物聯(lián)合治療III 行前列腺炎患者，并取得一定療效。因此，推測其可能存在一種未知病原微生物感染與III 型前列腺炎相關。諸多學者

3、經過廣泛深入研究，發(fā)現一種新的病原微生物--納米細菌(nanobacteria)與III 型前列腺炎有密切關系，且進一步相關動物實驗等研究基本證實其為III 型前列腺炎一種病因。但是納米細菌獨特的生物學行為為其臨床檢測及實際應用，指導臨床工作帶來了障礙。
　　 納米細菌是最近發(fā)現納米級病原微生物，呈球狀或桿狀，直徑約100-500nm。納米細菌在普通病原微生物培養(yǎng)條件不能生長，只能采用細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)增殖。納米細菌增殖周期較長，約

4、3-4周培養(yǎng)才能肉眼見到菌斑。而其獨特的生物礦化現象使其外周覆蓋一層由羥基磷灰石構成堅硬的外殼。因此常規(guī)方法不能檢測，臨床檢測納米細菌更加困難。目前納米細菌檢測鑒定僅限定在實驗范圍內，而且基本都是培養(yǎng)增殖后檢測，無各種檢測方法綜合比較研究，更無臨床實際應用及商品化的檢測手段。因此找尋一種可靠，快速的適用于III 前列腺炎的檢測方法，具有重要的臨床應用價值。
　　 方法：
　　 1．本研究從臨床150例Ⅲ型前列腺炎患者的前

5、列腺液中過濾方法分離納米細菌，分別直接采用間接免疫熒光(indirect immunofluorescence staining，IIFS)、茜素紅鈣染色、聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)基因擴增等方法檢測及研究，并以培養(yǎng)后間接免疫熒光方法(indirect immunofluorescence staining after culture，IIFSC)為基準，對各檢測方法進行比較評價。

6、>　　 2．采用第一步篩選出的納米細菌快速檢測法對50例III 型前列腺炎患者進行納米細菌檢測，并對檢出納米細菌感染患者予納米細菌敏感藥物四環(huán)素進行診斷性治療，治療效果判定采用公認的慢性前列腺癥狀評分(NIH-CPSI)標準。佐證該快速檢測方法臨床實際應用可靠性。
　　 結果：
　　 1.培養(yǎng)結果及納米細菌IIFSC 鑒定結果：
　　 培養(yǎng)4周觀察，發(fā)現部分管底有納米細菌貼壁生長，出現白色沉淀。所有培養(yǎng)標本離心

7、后用IIFSC 法鑒定納米細菌陽性83例，檢出率為55.3％。
　　 2.IIFS 法：納米細菌與小鼠的抗納米細菌單克隆抗體 8D10發(fā)生特異性結合，在熒光顯微鏡下可見陽性標本有綠色的桿狀或顆粒分布納米細菌。150例檢測標本納米細菌IIFS 法檢測有35例陽性，其檢出率為23.3％。以IIFSC 法為基準，IIFS 法檢出靈敏度42.2％，特異度為100％。IIFS 法檢出率明顯低于IIFSC 法(P<0.05)。
　　

8、 3.茜素紅鈣染色檢測法：油鏡下觀察納米細菌體積極其微小，聚集成簇。150例標本中有32例納米細菌茜素紅鈣染色法檢測陽性，陽性率為21.3％。以IIFSC 法為基準，茜素紅鈣染色法的靈敏度34.9％，特異度為95.5％。茜素紅鈣染色檢出率也明顯低于IIFSC 法(P<0.05)。
　　 4.PCR 法：PCR 法擴增納米細菌16S rRNA基因，陽性標本可見1406bp 特異性條帶。擴增產物經克隆測序后與納米細菌16S rRNA

9、 序列比對相似性達97％。150例樣本中有86例納米細菌PCR 檢測陽性，其檢出率為57.3％。以IIFSC 法為基準，PCR法檢測靈敏度95.2％，特異度為89.6％。PCR 法檢出率與IIFSC 法相當(P>0.05)。
　　 5. 采用PCR 檢測法檢測臨床III 型前列腺炎新鮮前列腺液標本50例，其中30例納米細菌感染陽性，納米細菌感染病人經四環(huán)素抗納米細菌治療，其中1例失訪。治療總有效率為93.1％。治療前后CPSI總

10、評分下降程度為13.65±3.90，治療效果顯著(P<0.05)。這一結果基本佐證了PCR 快速檢測III 型前列腺炎納米細菌感染可靠性。
　　 結論及展望：
　　 1．III 型前列腺炎檢測納米細菌感染，常規(guī)間接免疫熒光、鈣染色檢測納米細菌靈敏度低，不適宜臨床應用。
　　 2．III 型前列腺炎檢測納米細菌感染，PCR 法快速檢測納米細菌，其靈敏度及特異度均較好，能快速完成前列腺液標本納米細菌檢測，基本符合臨床