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文檔簡(jiǎn)介
1、背景:慢性前列腺炎(Chronic Prostatitis Syndrome,CPS)是目前成年男性中一種常見疾病,是世界范圍內(nèi)僅次于糖尿病影響男性健康的重要疾病,并且發(fā)病率呈上升的趨勢(shì)。在我國(guó)泌尿外科門診病人中CP患者約占25%,超過(guò)一半的男性在一生中的某一些階段有過(guò)CPS的癥狀。CPS可引起尿頻、尿急、排尿困難、疼痛。CPS與性功能障礙、不育的相關(guān)性研究也日益引起重視。其中90%為Ⅲ型(ChronicProstatitis/Chro
2、nic plvic pain syndrome,CP/CPPS)。ⅢA(慢性前列腺炎)、ⅢB(慢性骨盆疼痛綜合癥)各近50%。常規(guī)細(xì)菌方法培養(yǎng)無(wú)細(xì)菌,臨床常用抗感染治療并且有效,提示該型前列腺組織可能同樣存在微生物。對(duì)Ⅲ型CPS患者前列腺按摩液(EPS)采用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌,68%發(fā)現(xiàn)凝固酶陰性球菌,19.1%發(fā)現(xiàn)L型細(xì)菌。但是,因?yàn)檫x擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)費(fèi)時(shí)費(fèi)力,且條件限制,部分微生物難以培養(yǎng),導(dǎo)致假陰性結(jié)果,影響了對(duì)該病的認(rèn)識(shí)和臨床療
3、效。
分子生物學(xué)方法,如變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)、高通量454測(cè)序技術(shù),為研究健康男性以及Ⅲ型前列腺炎患者的前列腺微生態(tài)及菌群改變提供了嶄新的思路。有文獻(xiàn)報(bào)道在前列腺穿刺活檢組織中查尋前列腺中全部菌群,試圖找到關(guān)鍵引起CP/CPPS發(fā)生的關(guān)鍵病原菌。但作為有創(chuàng)性方法,前列腺穿刺活檢有適應(yīng)證及取材的限制。而EPS和精液因取材方便,可多次取樣,易評(píng)
4、價(jià)療效。
因此本研究將聯(lián)合以上兩種分子生物學(xué)技術(shù),研究Ⅲ型前列腺炎患者EPS和精液的微生態(tài)及菌群改變,作為創(chuàng)新點(diǎn)。
目的:基于16S rDNA基因V3區(qū)PCR-DGGE(變性梯度凝膠電泳)半定量檢測(cè)和高通量454二代測(cè)序技術(shù),調(diào)查CP患者的前列腺按摩液和精液微生物群落結(jié)構(gòu)的組成,探討CP與菌群變化的相關(guān)性,期望為Ⅲ型慢性前列腺炎進(jìn)一步明確病因,為診斷和治療提供新的線索,從而針對(duì)性選擇治療措施,以達(dá)到改善療效、縮短療程
5、目的。
方法:研究的對(duì)象為Ⅲ型慢性前列腺炎患者和正常健康男性對(duì)照組各30例,用兩種方法檢測(cè)前列腺按摩液及精液標(biāo)本:
1.基于16S rRNA的PCR-DGGE指紋圖譜分析精液和前列腺按摩液的微生物菌群多樣性變化;
2.基于高通量454二代測(cè)序技術(shù)研究精液和前列腺按摩液的微生物菌群組成結(jié)構(gòu)及變化。
結(jié)果:1.DGGE譜和高通量454二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)結(jié)果一致。健康男性生殖道存在一個(gè)正常的微生物群落。每
6、個(gè)個(gè)體的前列腺按摩液與精液菌群有明顯同源條帶。在群落結(jié)構(gòu)組成比例上,每個(gè)個(gè)體的精液和前列腺按摩液的菌群整體組成結(jié)構(gòu)存在顯著差異;前列腺炎患者的前列腺按摩液與精液菌群組成的結(jié)構(gòu)相似性均顯著低于正常健康對(duì)照組。
2.前列腺按摩液和精液的主要菌群的組成門類相似,主要由厚壁菌門(Firmicutes)、放線菌門(Actinobacteria),擬桿菌門(Bacteroidetes),變形桿菌門(Proteobacteria),梭桿菌門
7、(Fusobacteria),無(wú)壁菌門(Tenericutes),藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobacteria),綠屈撓菌門(Chloroflexi),和酸桿菌門(Acidobacteria)等構(gòu)成。其組成除放線菌門和擬桿菌門外,其他優(yōu)勢(shì)菌在門的水平上均存在顯著差異(P<0.05或P<0.01)。例如厚壁菌門在EPS中占整個(gè)菌群組成的59.9%,而厚壁菌門在精液中雖然仍是主要優(yōu)勢(shì)菌群,但是僅占整個(gè)菌群的39.5%。,精液中以下細(xì)菌較EPS顯著增
8、加:變形桿菌門(19.23% vs.7.2%),梭桿菌門(4.04%vs.3.57%),無(wú)壁菌門(2.28%vs.1.38%),藍(lán)細(xì)菌門(3.28%vs.0.95%),綠屈撓菌門(1.56% vs.0.44%)。相反,與EPS相比,精液中放線菌門比例顯著降低(0.26%vs.0.66%)。
3.Ⅲ型前列腺炎患者的精液菌群組成與健康對(duì)照組存在顯著差異。在門的水平上,前列腺炎患者的精液中疣微菌門(Verrucomicro)和互養(yǎng)菌
9、門(Synergistetes)顯著高于正常健康對(duì)照組。
1.4.Ⅲ慢性前列腺患者的前列腺按摩液與健康對(duì)照組比較,在門的水平上,與精液的結(jié)果一致,疣微菌門顯著高于正常健康對(duì)照組,并且僅在在慢性前列腺炎患者中可以檢出,益生菌乳酸桿菌(Lactobacillus)的相對(duì)豐度顯著降低。
結(jié)論:本研究首次對(duì)男性精液和前列腺按摩液的微生物菌落進(jìn)行了全面分析,發(fā)現(xiàn)其組成遠(yuǎn)比以往認(rèn)識(shí)的豐富;
1.每個(gè)個(gè)體的精液、前列腺按
10、摩液存在共有菌,但整體上二者菌群組成存在明顯差異,提示在菌群組成結(jié)構(gòu)上,精囊液與前列腺液可能存在不同;
2.Ⅲ前列腺炎患者的精液菌群結(jié)構(gòu)較健康男性發(fā)生了顯著變化,疣微菌門(Verrucomicro)和互養(yǎng)菌門(Synergistetes)顯著高于正常健康對(duì)照組;
3.Ⅲ前列腺炎患者的前列腺按摩液菌群雖然變化不顯著,但同樣檢測(cè)出疣微菌門(Verrucomicro)菌,值得動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究其作用。
4.Ⅲ前列
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