擬南芥FLU及其與調控靶蛋白GluTR的結構生物學研究.pdf

1、在植物、藻類以及大多數(shù)細菌中，四吡咯的生物合成為生物有機體提供了包括葉綠素、血紅素在內的重要的輔因子和色素。四吡咯的生物合成由GluTR通過heme進行調控，GluTR是四吡咯合成的關鍵限速酶，而在黑暗條件下FLU通過負調控抑制GluTR的活性，并與GluTR相互作用。
　　本文通過原核表達與Ni-NTA親和層析以及分子篩層析，分別純化得到純度較高的FLU和FLU-GluTR復合物蛋白，經(jīng)過晶體篩選和優(yōu)化獲得了它們的晶體，并通過分

2、子置換法成功解析了FLU，最后獲得分辨率為1.45(A)的數(shù)據(jù)。FLU與GluTR復合物晶體以FLU的TPR結構作為搜索模型，最后獲得了分辨率為2.4(A)的數(shù)據(jù)。FLU晶體結構顯示其由三個非典型的TPR結構域組成，并由TPR3形成二聚體，證實了TPR作為一個功能單位的假設。TPR2上的Ala262是TPR上少數(shù)幾個非常保守的氨基酸之一，發(fā)生突變將產(chǎn)生擬南芥致死型。FLU-GluTR復合物晶體結構顯示FLU與GluTR蛋白以2∶2的比例

3、結合，F(xiàn)LU通過TPR結構域上的TPR1和TPR3與GluTR的C端相互作用，這種相互作用是通過它們之間的5個鹽橋和1個氫鍵的形成發(fā)生的。通過ITC實驗驗證了FLU-GluTR相互作用的主要氨基酸。高等植物中GluTR的C端是非常重要的，其結構完整性是GluTR與FLU相互作用的基礎。FLU與GluTR在體外可以形成穩(wěn)定復合物，缺失C端15個氨基酸的GluTR可以形成二體，并仍能與FLU相互作用。體外活性實驗表明，F(xiàn)LU與GluTR的相