AsFMT和AtNSP1蛋白的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究.pdf

1、由于木質(zhì)素的普遍存在，在工業(yè)生產(chǎn)尤其生物能源的產(chǎn)出中，植物很難被分解并加以利用。為更好地利用植物，降低工業(yè)生產(chǎn)的能量消耗，改造木質(zhì)素使其更容易被化學(xué)解聚成為熱門的研究方向。最新的研究發(fā)現(xiàn)，木質(zhì)素單體-阿魏酸鹽轉(zhuǎn)移酶(FMT)可以在楊樹的木質(zhì)素多聚物中引入酯鍵，從而使木質(zhì)素更容易被分解利用，減少能耗，具有良好的應(yīng)用前景。實(shí)驗(yàn)證明，從當(dāng)歸中提取DNA，克隆得到AsFMT相關(guān)基因，并把該基因轉(zhuǎn)到植物的基因組中，最終合成的木質(zhì)素中含有阿魏酸。<

2、br>　　本論文成功構(gòu)建了關(guān)于AsFMT(1-441aa)的克隆，通過將蛋白連接GST標(biāo)簽，成功使其在大腸桿菌內(nèi)進(jìn)行表達(dá)。通過對表達(dá)的蛋白的純化，獲得了AsFMT的蛋白。通過結(jié)晶實(shí)驗(yàn)，我們最終獲得八個(gè)可供晶體生長的池液條件，經(jīng)過一系列的晶體優(yōu)化，獲得了較高質(zhì)量的蛋白晶體。
　　本論文的另一部分是關(guān)于擬南芥NSP1蛋白的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究，十字花科植物中有一種重要的次生代謝產(chǎn)物硫苷，黑芥子酶水解硫苷，硫苷水解過程與一些指示蛋白相關(guān)，不同

3、指示蛋白存在時(shí)其代謝產(chǎn)物不同，到目前為止，已鑒定的指示蛋白包括表面活化蛋白(ESPs)，硫氰酸鹽形成蛋白(TFPs)和腈標(biāo)記蛋白(NSPs)，只有NSP的結(jié)構(gòu)和催化機(jī)理尚未解決。本文對AtNSP1蛋白的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行研究，構(gòu)建了pET-22b(+)為載的重組質(zhì)粒，利用原核生物大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)出目的蛋白后進(jìn)行晶體篩選，得到高質(zhì)量晶體后通過X射線衍射數(shù)據(jù)結(jié)合分子置換進(jìn)行分析，目前已得到分辨率為3.02(A)的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)，分子對接揭示