核旁斑點結構蛋白1(PSPC1)在DNA損傷應激反應中的生物學功能研究.pdf

1、核旁斑點結構蛋白1(paraspeckle protein1，PSPC1)是第一個被發(fā)現(xiàn)的核旁斑點(paraspeckle)的結構蛋白，但是到目前為止，PSPC1的功能尚不清楚。在我們的前期蛋白組學研究過程中發(fā)現(xiàn)，化療藥物順鉑(cisplatin)染毒HeLa細胞后PSPC1蛋白水平增加。這一現(xiàn)象提示，PSPC1可能參與順鉑誘導的DNA損傷應激反應過程(DNA damage response，DDR)。因此，在本研究中，我們研究探討了P

2、SPC1在DDR中發(fā)揮的生物學功能。首先，我們明確了在HeLa細胞中，不但順鉑可以誘導PSPC1蛋白水平增加，而且DNA損傷劑(DNA damaging agent)甲磺酸甲酯(Methyl methanesulfonate，MMS)也可以誘導PSPC1蛋白水平增加。如果通過小RNA干擾（siRNA）抑制HeLa細胞內(nèi)PSPC1蛋白表達，不僅細胞生長被抑制，而且細胞凋亡、細胞的活性氧(reactive oxygen species，RO

3、S)水平、細胞的DNA損傷程度都有顯著增加，這一結果表明PSPC1很可能參與了細胞的DDR。但是進一步研究發(fā)現(xiàn)PSPC1不與DDR中的重要蛋白γH2AX共定位，也不與同源重組修復(homologous recombination repair, HR)中的核心蛋白p53結合蛋白1(p53 bindingprotein1，53BP1)或RAD51共定位。此外，在PSPC1缺失細胞中DNA修復的動力學過程沒有發(fā)生明顯變化。以上結果表明PSP

4、C1可能并不直接參與上述3個蛋白介導的DNA修復過程。但有趣的是，PSPC1蛋白表達被抑制后，正常的細胞周期被破壞，細胞更多的會被阻滯在G2/M期。如果在順鉑誘導的處于G1/S期阻滯的HeLa細胞中抑制PSPC1表達，將會誘導細胞逃逸G1/S周期檢驗點，導致細胞進入G2/M期;而在MMS誘導的G2/M期阻滯的細胞中，降低PSPC1表達水平則會增強G2/M期阻滯，兩種情況最終都導致更多的細胞死亡;而高表達PSPC1后，更多的細胞被阻滯在S

5、期，進入G2/M期的細胞數(shù)量減少。免疫共沉淀結果顯示，PSPC1可以與ATR相互作用蛋白(ATR-interaction protein，ATRIP)相互作用，提示PSPC1很可能通過與ATRIP相互作用參與細胞周期調控過程?？傊狙芯拷沂玖薖SPC1在DDR中可能的生物學功能，即通過調節(jié)G1/S周期檢驗點影響DDR過程。在細胞DNA損傷時，PSPC1蛋白水平增加從而導致細胞阻滯在S期，利于DNA修復的進行;而當PSPC1表達缺失時，