Bif-1在肝癌中的生物學功能及作用機制研究.pdf

1、肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上腫瘤發(fā)病率中第五名,在中國占第二位,每年約有32萬肝癌病例,約占全球發(fā)病率的55％。由于早期癥狀不典型,臨床確診的肝癌多數(shù)已是肝癌的三到四期,并伴有門脈癌栓形成或肺轉(zhuǎn)移。大約90％以上腫瘤所致的死亡要歸咎于腫瘤轉(zhuǎn)移和復發(fā)。因此,研究腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生機制及抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的治療手段是腫瘤防治中的重要環(huán)節(jié)。
　　研究目的:
　　通過對Bif-1影響細胞增殖和移動的

2、分子機制及其相互作用的研究,深入探討腫瘤生長轉(zhuǎn)移的分子機制,為抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和生長提供新的靶點和理論依據(jù)。
　　實驗方法:
　　第一部分 Bif-1在肝癌中的表達及其與臨床預后的關(guān)系
　　通過檢測肝癌和癌旁組織樣本中Bif-1在mRNA水平和蛋白水平的表達水平,進一步明確其在成對的樣本中的表達趨勢,并且組織芯片將目的基因在不同組織樣本中的表達情況與臨床資料相互聯(lián)系,分析Bif-1與肝癌患者腫瘤大小、腫瘤分期、轉(zhuǎn)移、癌栓形

3、成、腫瘤復發(fā)等臨床特征之間的關(guān)系,并對有統(tǒng)計學差異的臨床特征在細胞水平進行進一步研究,并結(jié)合隨訪結(jié)果探討目的基因與患者預后(無瘤生存期和總體生存期)的關(guān)系。
　　第二部分 Bif-1對肝癌細胞生物學功能的影響及作用機制研究
　　在不同的肝癌細胞系中(CSQT-2,MHCCLM3,HepG2)進一步用qRT-PCR檢測目的基因的表達情況。用RNAi技術(shù)對目的基因進行干擾,觀察細胞相關(guān)的生物學功能的改變情況。并根據(jù)其生物學功能的

4、改變進一步對其作用機制進行研究,明確其相互作用及其信號調(diào)控網(wǎng)絡。
　　結(jié)果
　　第一部分:
　　RT-PCR結(jié)果顯示在50對癌和癌旁之中,Bif-1有42對組織Bif-1的表達是在癌組織高于癌旁,同時Western Blot的結(jié)果也反映了同樣的表達趨勢。另根據(jù)組織芯片染色和臨床資料統(tǒng)計分析結(jié)果顯示Bif-1的表達與腫瘤的大小,門靜脈癌栓的形成,腫瘤微血管侵犯和復發(fā)這四個臨床指標有一定的相關(guān)性。術(shù)后生存分析也發(fā)現(xiàn) Bif

5、-1能夠影響肝癌患者術(shù)后的無瘤生存期(P=0.035)和總體生存期(P=0.047),因此, Bif-1可望成為一個新的評價肝癌患者預后的指標。
　　第二部分:
　　Bif-1的表達能夠促進肝癌細胞的增殖和在裸鼠體內(nèi)的成瘤性。我們發(fā)現(xiàn)在肝癌細胞中的表達Bif-1能促進肝癌細胞的轉(zhuǎn)移能力(Transwell),侵襲能力(Invasion)和細胞極性的形成,而干擾Bif-1的表達,則引起細胞骨架蛋白Cdc42下降及其活性降低,并

6、且Bif-1含量與Cdc42表達呈正相關(guān)調(diào)控。Bif-1免疫熒光染色揭示Bif-1可出現(xiàn)在細胞核。,核質(zhì)分離實驗在細胞核蛋白中證實了這一結(jié)果。染色質(zhì)免疫共沉淀實驗表明Bif-1能夠在基因水平調(diào)控Cdc42的轉(zhuǎn)錄。
　　結(jié)論
　　本課題通過臨床肝癌樣品,HCC細胞和各種研究手段,研究了Bif-1在肝癌細胞增殖、轉(zhuǎn)移等細胞生物學行為的作用,揭示了Bif-1在肝癌組織中表達升高并參與腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。Bif-1調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移的機制是

7、通過對影響Cdc42表達和活性。同時, Bif-1在肝癌組織中的水平,與腫瘤大小和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的發(fā)生有關(guān),后者是影響預后的主要原因。因此,Bif-1可成為判斷肝癌預后的一項新指標,抑制Bif-1的表達可望成為抑制肝腫瘤的新靶點。
　　本課題創(chuàng)新點及潛在應用價值
　　明確了Bif-1的表達與肝癌患者臨床預后的關(guān)系,為腫瘤的臨床研究提供一定參考依據(jù),并且首次發(fā)現(xiàn)了Bif-1在細胞核中表達通過調(diào)控促進Cdc42的轉(zhuǎn)錄和其蛋白的活性促進