NEDD9在肝癌組織中的表達(dá)、功能及其機制研究.pdf

1、目的:探討NEDD9在人肝癌組織中的表達(dá)情況，分析其與肝癌臨床病理特征的相關(guān)關(guān)系，明確肝癌中NEDD9異常表達(dá)的臨床意義。在5株肝癌細(xì)胞株中，采用WB及qRT-PCR檢測NEDD9的表達(dá)情況，選取Hep-G2、MHCC-97-H，采用NEDD9特異性siRNA，研究NEDD9基因沉默后對肝癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響。
　　方法:收集廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院肝膽外科2010年至2012年外科手術(shù)切除并經(jīng)過病理證實的肝細(xì)胞癌組

2、織及臨近的非癌組織標(biāo)本112例。提取肝癌及鄰近非癌組織總RNA，采用qRT-PCR檢測NEDD9在肝癌組織及鄰近非癌組織中mRNA的表達(dá)，采用Westernblot檢測各肝癌細(xì)胞株中NEDD9蛋白表達(dá)情況，比較肝癌組織與鄰近非癌組織、肝癌細(xì)胞株與永生化肝細(xì)胞株中NEDD9的表達(dá)。并利用免疫組化學(xué)方法檢測112例肝癌及鄰近非癌組織標(biāo)本中NEDD9蛋白的表達(dá)，將其分為低表達(dá)組（0-5分）及高表達(dá)組（6-12分），分析NEDD9高低表達(dá)組與肝

3、癌臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系。選取Hep-G2、MHCC-97-H2株肝癌細(xì)胞株，采用RNA干擾技術(shù)沉默NEDD9，研究NEDD9基因沉默后對肝癌細(xì)胞生長、凋亡、遷移和侵襲的影響。
　　結(jié)果:（1）NEDD9在不同肝癌細(xì)胞系中表達(dá)量不同，除SK-hep-1細(xì)胞系外，在Hep-G2、MHCC-97-H、SSMC-7721、Huh7細(xì)胞系中，表達(dá)量均高于 HL7702（p<0.05）。在隨機選取的4對樣本組織中，NEDD9在肝癌組織明顯

4、高于非癌組織（p<0.05）。qRT-PCR結(jié)果顯示：在肝癌組織中，NEDD9 mRNA表達(dá)量明顯高于非癌組織（P=0.002<0.05），且在肝癌組織中42.9％(48/112) NEDD9 mRNA表達(dá)量上調(diào)2倍以上。
　　（2）NEDD9的表達(dá)與甲胎蛋白（AFP，P=0.029）、BCLC分期（P=0.036）、腫瘤大小（p=0.041）和組織學(xué)分級（p=0.002）相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.228、0.288、0.232、0

5、.311（P<0.05），與年齡、性別、乙型肝炎、Child-Pugh分級，腫瘤數(shù)目，腫瘤包膜和癌栓無關(guān)。同時NEDD9的表達(dá)量與DFS和OS相關(guān)，進(jìn)一步采用COX分析，NEDD9高表達(dá)組（6-12分）與低表達(dá)組（0-5分）相比，DFS（P=0.04<0.05）及OS（P<0.001）均縮短。COX單變量分析結(jié)果表明，癌栓、腫瘤大小、BCLC分期、血清AFP、組織學(xué)分級和NEDD9的表達(dá)量與肝癌預(yù)后密切相關(guān)。COX多因素分析表明，腫瘤大

6、?。≒=0.012），BCLC分期（P=0.040）和NEDD9（P<0.001）的表達(dá)量是肝癌預(yù)后的獨立因素。
　?。?）NEDD9-siRNA沉默后，肝癌細(xì)胞株MHCC97-H、HepG2 NEDD9的mRNA及蛋白表達(dá)量下調(diào)，最高下調(diào)為1/20。沉默后MHCC97-H、HepG2的增殖、遷移及侵襲均受到抑制，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡。其中對增殖的抑制在72h最大，其抑制率為63士2%（P<0.01）。細(xì)胞遷移（332VS207，P<