版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領
文檔簡介
1、E2-EPF是E2泛素結(jié)合酶家族成員之一,分子量為24KD,在多種腫瘤組織中高表達。E2泛素結(jié)合酶同E1泛素激活酶,以及E3水解酶一起,催化蛋白質(zhì)泛素化,進而被蛋白酶小體降解。腫瘤抑制因子pVHL是E3泛素水解酶復合體的一部分,它可使HIF等降解。E2-EPF泛素結(jié)合酶可使pVHL發(fā)生水解,進而使得HIF-1()表達水平增強。HIF-1()作為細胞低氧應答反應中起核心作用的轉(zhuǎn)錄因子,能調(diào)節(jié)100多種與低氧應激下細胞適應和存活相關的靶基因
2、。HIF-1()是參與腫瘤增殖、血管增生、轉(zhuǎn)移等過程的重要分子。E2-EPF泛素結(jié)合酶表達水平增高,可通過pVHL-HIF-1()途徑促進癌細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。
E2-EPF在宮頸癌細胞中的作用尚未見報道,本研究旨在闡明E2-EPF在宮頸癌細胞中的表達水平和功能。主要研究內(nèi)容如下:
一、E2-EPF在宮頸鱗狀細胞癌組織中高表達
選取了宮頸鱗狀細胞癌標本75例,正常宮頸組織13例為研究對象,采用
3、實時熒光定量PCR技術檢測E2-EPF mRNA表達水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中E2-EPF mRNA水平是正常宮頸組織的4.08倍;Ⅱ期以上宮頸癌組織中E2-EPF的mRNA表達水平是Ⅰ期的2.72倍,二者均具有顯著差異。由此可見,E2-EPF在宮頸癌組織中也呈高表達狀態(tài),并且與腫瘤細胞的惡性程度有一定的相關。
二、宮頸癌細胞系SIHA E2-EPF低表達克隆的建立
采用商品化E2-EPF shRNA質(zhì)粒載體
4、下調(diào)細胞內(nèi)源性E2-EPF。通過脂質(zhì)體將E2-EPFshRNA質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染入SIHA細胞,并通過嘌呤霉素篩選獲得了穩(wěn)定的E2-EPF低表達克隆,共篩選獲得15個E2-EPF低表達克隆,mRNA水平下降可達到正常SIHA細胞的18%左右,蛋白水平降至正常水平的20%左右。
三、E2-EPF下降后導致HIF-1()的表達下降
由于HIF-1α在常氧狀態(tài)下極不穩(wěn)定,常規(guī)的方法不易檢測到HIF-1α的存在。本實驗采用
5、熒光素酶報告系統(tǒng)成功的檢測到微量的HIF—1α。結(jié)果顯示,E2-EPF的表達與HIF-1a成正相關,低表達克隆細胞內(nèi)HIF-1a水平較正常對照組明顯降低。
四、E2-EPF下調(diào)后對細胞周期、增殖及侵襲性生物學特性的影響
采用MTT細胞增殖實驗檢測發(fā)現(xiàn),E2-EPF低表達克隆細胞的增殖速度顯著低于正常和對照細胞。軟瓊脂克隆形成實驗發(fā)現(xiàn),E2-EPF低表達克隆細胞其克隆形成能力遠遠低于正常和對照細胞。以流式細胞術
6、檢測細胞周期發(fā)現(xiàn),E2-EPF低表達克隆細胞的G0-G1期細胞百分比顯著增加,S和G2-M期(尤其是S期)細胞數(shù)減少,細胞增殖減慢。采用經(jīng)典的Transwell小室研究E2-EPF對細胞侵襲能力的影響發(fā)現(xiàn),E2-EPF低表達克隆細胞穿膜細胞較正常和對照細胞明顯減少。本部分研究結(jié)果說明,E2-EPF下調(diào)后對SIHA細胞的細胞周期、增殖及侵襲性等生物學行為具有顯著的影響。
五、E2-EPF下調(diào)對放、化療的影響
細
7、胞經(jīng)0Gy,4 Gy,7 Gy,10 Gy4個不同劑量X線照射后,采用MTT法檢測細胞相對數(shù)量,發(fā)現(xiàn)不同劑量下,E2-EPF低表達克隆細胞的存活數(shù)量和正常、對照組細胞沒有顯著差異。采用Annexin-Ⅴ、PI聯(lián)合的流式細胞術檢測細胞凋亡發(fā)現(xiàn),各個劑量下,細胞凋亡和死亡的數(shù)量在各組之間沒有差異。說明E2-EPF下調(diào)后,對細胞的放療耐受性沒有顯著影響。
采用不同機理化療藥物:順鉑、紫杉醇、多烯紫杉醇、拓撲替康、依托泊苷、表阿霉
8、素,以不同濃度分別加入各組細胞中,觀察E2-EPF下調(diào)后是否對化療藥物療效有一定影響。采用MTT法檢測細胞存活的相對數(shù)量,結(jié)果發(fā)現(xiàn):降調(diào)內(nèi)源性E2-EPF水平,可以增加細胞對拓撲異構(gòu)酶Ⅰ抑制劑——拓撲替康,拓撲異構(gòu)酶Ⅱ抑制劑——依托泊苷和表阿霉素的敏感性,但是對順鉑、紫杉醇和多烯紫杉醇的作用無明顯影響。以上試驗說明,E2-EPF下降后增加了部分化療藥物的療效,可以作為宮頸癌化療聯(lián)合用藥的一種增效途徑。
六、E2-EPF下調(diào)
9、后裸鼠成瘤能力顯著下降
本實驗通過接種一定數(shù)量的腫瘤細胞,發(fā)現(xiàn)E2-EPF低表達組腫瘤生長速度減慢、瘤體大小減小。E2-EPF低表達組平均瘤體重量僅相當于對照組的1/4,這就提示E2-EPF在腫瘤的發(fā)展中具有重要的作用。體內(nèi)實驗進一步說明降調(diào)E2-EPF的表達可以作為晚期宮頸癌生物學治療的重要方法。
結(jié)論:E2-EPF在宮頸癌組織中成高表達狀態(tài),且其表達量的高低和臨床腫瘤分級具有一定的相關性。通過RNAi下調(diào)
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- JunD在宮頸癌進展中的功能及其分子機制研究.pdf
- STOML-2在宮頸癌中的表達及其功能研究.pdf
- Ezrin在宮頸癌中的表達及功能研究.pdf
- AEG-1在宮頸癌中的表達及其作用機制研究.pdf
- WDHD1在HPV E7誘發(fā)的宮頸癌及其他腫瘤細胞中的功能及調(diào)節(jié)機制.pdf
- LEDGF在宮頸癌中的表達及其意義.pdf
- Twist在宮頸癌中的表達及其與E-Cadherin相關性的研究.pdf
- 宮頸癌中趨化因子CXCL5的表達及其功能研究.pdf
- TLR4在宮頸癌中的表達及相關功能研究.pdf
- SIRT1在宮頸癌及宮頸癌前病變組織中的表達及其臨床意義.pdf
- STC1在宮頸癌中的表達及作用機制研究.pdf
- 環(huán)氧化酶-2在宮頸癌中的表達及其意義.pdf
- RUNX3在宮頸癌組織中的表達及其對宮頸癌Hela細胞增殖活性的影響.pdf
- Survivin、PTEN在宮頸癌前病變和宮頸癌中的表達及其與P53的關系.pdf
- miR-92a在宮頸癌中的表達及其意義.pdf
- BCL11A在宮頸癌組織中的表達及其在宮頸癌細胞中的作用及影響.pdf
- IL-8在宮頸癌的表達及其對Hela宮頸癌細胞增殖、遷移的影響及其機制.pdf
- Livin,Caspase-3蛋白在宮頸癌中的表達及熊果酸體外抑制宮頸癌SiHa細胞的機制研究.pdf
- E-cad、VIM、LOX、FAK、SFRP5蛋白在宮頸癌前病變、宮頸癌中的表達變化及意義.pdf
- miR-31在宮頸癌患者血漿中的表達及對宮頸癌細胞功能的影響.pdf
評論
0/150
提交評論