Synbindin蛋白和eIF4G家族中p97-CTD的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究.pdf

1、TRAPP((transportproteinparticle)復(fù)合物是真核生物細(xì)胞內(nèi)參與細(xì)胞內(nèi)膜泡與細(xì)胞膜tethering過程的蛋白復(fù)合物，在細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)有TRAPPⅠ和TRAPPⅡ兩種形式，其中BET3p，BET5p，Trs20p，Trs23p，Trs31p，Trs33p，Trs85p是共有的，而Trs65p，Trs120p，Trs130p是TRAPPⅡ所特有的，其中TRAPPⅠ結(jié)合在從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)運(yùn)輸?shù)礁郀柣w的膜泡上，而TRAPPⅡ參

2、與高爾基體內(nèi)部的運(yùn)輸。我們所研究的Synbindin蛋白是TRAPP復(fù)合物中Trs23p在人體中的同源蛋白，最先通過酵母雙雜交法在人體海馬趾神經(jīng)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，通過與Syndecan-2的胞內(nèi)部分相互作用，從而參與神經(jīng)樹突的形成。我們克隆了該蛋白的基因，在大腸桿菌中得到過量表達(dá)，在純化和結(jié)晶該蛋白后，根據(jù)Se-MAD法解析了該蛋白的2.8埃的晶體結(jié)構(gòu)；由于該蛋白晶體結(jié)構(gòu)中的PDZ類似結(jié)構(gòu)域活動(dòng)性較強(qiáng)，導(dǎo)致該區(qū)域的電子密度較差，為了獲得詳細(xì)的

3、PDZ類似結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)信息，我們又單獨(dú)克隆、表達(dá)了該結(jié)構(gòu)域，純化后獲得該結(jié)構(gòu)域的核磁結(jié)構(gòu)。 Synbindin的結(jié)構(gòu)包括兩個(gè)結(jié)構(gòu)域：位于N端的類似PDZ結(jié)構(gòu)域和位于C端的Longin結(jié)構(gòu)域即五個(gè)反平行的β折疊片位于中間，兩側(cè)包括一個(gè)N端的α螺旋，和C端的兩個(gè)反平行的α螺旋組成。從晶體結(jié)構(gòu)中，我們觀察到位于Synbindin中其Longin結(jié)構(gòu)域插入了位于N端的PDZ類似結(jié)構(gòu)域，這是目前所有已知Longin結(jié)構(gòu)域中首次發(fā)現(xiàn)。而且

4、這個(gè)PDZ類似結(jié)構(gòu)域在結(jié)構(gòu)上和典型的PDZ結(jié)構(gòu)域有一定的差異，通過Syndecan-2胞內(nèi)部分與APD之間的SPR、ITC、核磁滴定實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其和Syndecan-2胞內(nèi)部分的結(jié)合能力較弱。通過對(duì)Synbindin晶體結(jié)構(gòu)分析和TRAPP復(fù)合物中其他組成單位結(jié)構(gòu)比較，我們提出了Longin結(jié)構(gòu)域之間的可能的結(jié)合模式。 真核細(xì)胞mRNA的翻譯的開始是一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控過程，這需要很多蛋白的參與，這些蛋白稱為真核起始因子(eukary

5、oticinitiationfactor)，簡稱eIF。這中間eIF4G是一個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白，它可以結(jié)合eIF4A和eIF4E形成大的復(fù)合物eIF4F。eIF4G還可以募集eIF3，然和結(jié)合到核糖體的小亞基上。除此之外，eIF4G還可以結(jié)合PABP和Mnkl蛋白。 P97蛋白(又稱為DAP5)，是和eIF4G的中間和C末端同源的，在翻譯起始過程中起到調(diào)節(jié)作用的蛋白。它可能是作為eIF4G的迷你分子的形式存在，起到調(diào)節(jié)eIF4G功能的