右旋糖酐質(zhì)量控制新方法和新的藥學(xué)應(yīng)用研究.pdf

1、右旋糖酐（Dextran）是葡聚糖的一種，為一線(xiàn)型結(jié)構(gòu)的中性多糖，廣泛存在于微生物中，構(gòu)成右旋糖酐主鏈的糖酐鍵為α-1,6糖酐鍵，并含有少量以α-1,3連接的支鏈結(jié)構(gòu)。右旋糖酐是應(yīng)用最廣泛的葡聚糖，在醫(yī)藥、食品、化工等行業(yè)都有不同的用途。目前，右旋糖酐的生產(chǎn)是以蔗糖為底物，經(jīng)鏈球菌、乳酸桿菌、明串珠菌等微生物發(fā)酵而生成的高分子葡聚糖，再經(jīng)酸水解和乙醇分級(jí)得到具有不同相對(duì)分子質(zhì)量大小的右旋糖酐產(chǎn)品。但不同種類(lèi)微生物發(fā)酵產(chǎn)生的右旋糖酐分子量

2、差異很大，且支鏈形式和支鏈度上也存在很大差異。右旋糖酐分子量大小決定了其應(yīng)用范疇，如低分子右旋糖酐臨床上應(yīng)用于休克早期，中分子量的右旋糖酐其大小與人體血漿蛋白及球蛋白分子相近，可吸收進(jìn)入體內(nèi)然后水解為葡萄糖而作為能量補(bǔ)充劑。同時(shí)，右旋糖酐支鏈形式和支鏈度對(duì)右旋糖酐的實(shí)際應(yīng)用影響重大，但目前對(duì)右旋糖酐支鏈形式和支鏈度的判定缺乏有效的方法。在以往的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)中，對(duì)右旋糖酐支鏈形式及支鏈度的研究主要有氣質(zhì)聯(lián)用和核磁共振兩種方式。氣質(zhì)聯(lián)用方法分析

3、的前提是對(duì)樣品進(jìn)行甲基化、水解、乙?；纫幌盗醒苌?，在此過(guò)程中無(wú)可避免地導(dǎo)致了樣品部分結(jié)構(gòu)信息的丟失。并且由于不同連接方式寡糖的離子化效率不同，氣質(zhì)聯(lián)用方法不能準(zhǔn)確判斷支鏈度，只能判斷支鏈形式。核磁共振(NMR)是判斷支鏈形式和支鏈度的有效方式，但是NMR樣品耗量較大，且樣品的核磁譜信息會(huì)疊加在一起，費(fèi)時(shí)費(fèi)力很難解析。
　　本文以右旋糖酐的右旋糖酐酶(dextranase)水解產(chǎn)物為研究對(duì)象，旨在建立超高效親水相互作用色譜-飛行

4、時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用(UP-HILIC-Q/TOF)方法，通過(guò)優(yōu)化色譜方法對(duì)不同聚合度以及同一聚合度不同連接方式寡糖同分異構(gòu)體進(jìn)行分離，可以有效消除寡糖α，β異構(gòu)影響且不需要衍生化。利用二級(jí)質(zhì)譜MS/MS對(duì)酶解終產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，確證酶解終產(chǎn)物中寡糖聚合度及其連接方式。基于dextranase特異性水解葡聚糖α-1，6連接的作用，根據(jù)酶不識(shí)別片段的結(jié)構(gòu)即可推斷出右旋糖酐的支鏈形式。但同一聚合度不同連接方式的寡糖同分異構(gòu)體在此液相方法上的分離有限

5、，且不同結(jié)構(gòu)的寡糖質(zhì)譜響應(yīng)各異，不能很好地進(jìn)行定量分析。在此研究工作的基礎(chǔ)上，鑒于離子色譜(HPAEC，簡(jiǎn)稱(chēng) IC)對(duì)糖類(lèi)化合物很好的分離效果，以及安培脈沖檢測(cè)器(PAD)對(duì)糖類(lèi)化合物高靈敏度的特異性檢測(cè)作用，我們改進(jìn)儀器設(shè)置，在離子色譜和質(zhì)譜間安裝陽(yáng)離子樹(shù)脂交換抑制器(MSM)，對(duì)離子色譜得流動(dòng)想進(jìn)行在線(xiàn)脫鹽處理，克服了離子色譜高鹽濃度洗脫劑無(wú)法直接進(jìn)入質(zhì)譜來(lái)分析的難點(diǎn)，使在線(xiàn)安培檢測(cè)器和在線(xiàn)質(zhì)譜檢測(cè)平行存在成為可能。該方法成功搭建了

6、HPAEC-PAD-QTOF聯(lián)用平臺(tái)，很好地結(jié)合了離子色譜和QTOF高選擇性、高靈敏度、高準(zhǔn)確度等特性，能很好地應(yīng)用于右旋糖酐支鏈形式支鏈度的確定，該方法簡(jiǎn)便、高效、樣品耗量少，是糖類(lèi)化合物支鏈定性定量分析的有效方法?；诙嗵囚燃谆芴岣叨嗵堑娜芙舛取㈦娯?fù)性，改變多糖分子伸展方向及立體結(jié)構(gòu)，能讓多糖具備新的生物活性，本文主要研究了羧甲基化右旋糖酐寡糖在氧糖剝奪損傷模型中對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞缺糖缺氧保護(hù)作用，并探索羧甲基數(shù)量、羧甲基取代度與抗氧